無biāojìdìng量技術(Label-free)是研究定量dànbáizhì組學的技術之一,相較于傳統的biāojìdìng量技術,無biāojìdìng量蛋白技術具有顯著的優勢。傳統的biāojìdìng量方法通常涉及復雜的實驗步驟,耗時耗力,并且標記試劑成本高昂。然而,無biāojìdìng量技術無需特殊的實驗操作要求,省去了繁瑣的標記步驟,使得實驗流程更加簡潔高效。此外,該技術成本相對較低,樣品制備也相對簡單。目前使用zuì廣泛的非biāojìdìng量方法主要有2種,一種是基于質譜峰的峰面積或峰強度來進行定量,另外一種是基于蛋白的肽段鑒定數來進行定量。
1、基于質譜峰的峰面積或峰強度來進行定量
其原理基于肽段質譜信號與其含量之間的相關性,通過比較不同樣品中相同肽段的峰面積或峰強度,可計算出該肽段在不同樣品中的相對含量。這種方法也被稱為離子強度法或信號強度法。
2、基于蛋白的肽段鑒定數來進行定量
豐度較高的蛋白酶解后,其產生的肽段在質譜檢測中的可見性增強,被檢測到的幾率也大大提高。基于這一原理,可觀察到蛋白的豐度與其酶解后產生的肽段鑒定數之間呈現出顯著的正相關關系。因此,可以通過比較不同樣品中蛋白的肽段鑒定數實現對蛋白的相對定量。
圖1 Label-free技術的實驗過程
應用場景:Label-free技術特別適用于分析復雜度較低的樣品,如Co-IP、pull-down、亞細胞組分、DARTS樣品等。在這些情況下,該技術能夠提供準確且高效的dànbáizhì定量結果。此外,還常用于大樣本量的定量比較,以及對無法用biāojìdìng量實現的實驗設計。
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