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線粒體膜電位檢測試劑盒 JC-1

MCE 國際站：JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20℃ 12 個月 避光保存

簡介：線粒體膜電位檢測試劑盒 (JC-1) 是一種以 JC-1 為熒光探針，快速靈敏地檢測組織、細胞或純化的線粒體跨膜電勢差的試劑盒，可以用于早期的細胞凋亡檢測。

概述：MCE 線粒體膜電位試劑盒 (JC-1) (JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit) 是一種以 JC-1 為熒光探針，快速檢測線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于細胞、組織或純化的線粒體等樣本。ΔΨm 即線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential) 的變化是反映線粒體活力的重要參數，可由親脂性熒光染料 JC-1 檢測。線粒體膜電位較高時，JC-1 在基質中匯聚形成聚合物 (J-aggregates)，可以產生紅色熒光 (Ex/Em=585/590 nm)；線粒體膜電位較低時，JC-1 不能聚集在線粒體基質中，以單體形式存在產生綠色熒光(Ex/Em=510/527 nm)。線粒體膜電位下降是細胞凋亡早期的標志性事件。通過紅綠色熒光的相對比例變化，可以快速檢測線粒體膜電位下降，作為細胞凋亡早期的檢測指標。本產品提供了 CCCP 作為誘導線粒體膜電位下降的陽性對照。對于大多數細胞，經 CCCP 處理后，線粒體膜電位會喪失掉后，JC-1 染色后觀察呈綠色熒光，而正常的細胞經 JC-1 染色后應顯示紅色熒光。本產品可以用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計或流式細胞儀檢測，對于 6 孔板檢測可檢測 100 次。

描述：

ΔΨm，即線粒體膜電位，是線粒體功能的重要參數，已被用作細胞健康狀況的指標。使用 JC-1 研究 ΔΨm 的變化。在具有高 ΔΨm 的健康細胞中，JC-1 形成稱為 J 聚集體的復合物。而在具有低 ΔΨm 的細胞中，JC-1 保持單體形式。在 510 nm 處激發時，JC-1 單體發出綠色熒光，最大值約為 527 nm。JC-1 聚集體發出橙紅色熒光，最大值約為 590 nm。

操作說明：1. Phosphate-buffered saline (PBS) (1× )的配制a. 將 PBS (10×) 溫浴，直至融化。b. 按 1:10 的比例，用 dH2O 稀釋 PBS (10×) 至 PBS (1×)。2. 細胞染色1) 懸浮細胞：a. 以 6 孔板為例，每孔用 1 mL 培養基重懸 100 萬細胞，其他培養器皿以此類推。b. 陽性對照的設置：取適量 CCCP (50 mM) 恢復至室溫，陽性對照孔培養基中加入 1 μL，其終濃度為 50 μM，細胞培養箱 37℃ 孵育 5 分鐘。c. 取適量 JC-1 (200 μM) 恢復至室溫，每孔培養基中加入 10 μL JC-1 (200 μM)，其終濃度為 2 μM，細胞培養箱 37℃ 孵育 15-20 分鐘。如需對該細胞進行另外的染色操作，則按步驟 3 操作。d. 37℃ 孵育結束后，400 g 4℃ 離心 3-4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。e. 用 PBS (1×) 洗滌 2 次：加入 2 mL PBS (1×) 重懸細胞，400 g 4℃ 離心 3-4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。重復洗 1 次。f. 再用 500 μL 的 PBS (1×) 重懸細胞，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計或流式細胞儀分析 (綠色熒光：Ex/Em=510/527 nm；紅色熒光：Ex/Em=585/590 nm)。2) 貼壁細胞：注：若用熒光分光光度計或流式細胞儀檢測貼壁細胞，可先對貼壁細胞進行消化、收集，重懸后參考懸浮細胞的檢測方法。若用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡檢測，方法如下：a. 以 6 孔板為例，每孔加入 1 mL 細胞培養基。b. 陽性對照的設置：取適量 CCCP (50 mM) 恢復至室溫，陽性對照孔培養基中加入 1 μL，其終濃度為 50 μM，輕搖混勻，細胞培養箱 37℃ 孵育 5 分鐘。c. 取適量 JC-1 (200 μM) 恢復至室溫，每孔培養基中加入 10 μL JC-1 (200 μM)，其終濃度為 2 μM，輕搖混勻，細胞培養箱 37℃ 孵育 15-20 分鐘。如需對該細胞進行另外的染色操作，則按步驟 3 操作。d. 37℃ 孵育結束后， 吸除上清，用 PBS (1×) 洗滌 2 次。e. 加入 500 μL PBS (1×) ，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察 (綠色熒光：Ex/Em=510/527 nm；紅色熒光：Ex/Em=585/590 nm)。3. 細胞復染 (以 Annexin V 舉例，需自備，本試劑盒不提供)a. 在步驟 2.c 后，用 PBS (1×) 洗滌 2 次：加入 2 mL PBS (1×) 重懸細胞，400 g 4℃ 離心 3-4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。重復洗 1 次。b. 使用 100 μL 的 Annexin V 結合緩沖液 (10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4) 重懸經 JC-1 染色的細胞。c. 加入適量 Annexin V 染色液，細胞培養箱中 37℃ 孵育 15 分鐘。d. 再加入 400 μL 的 Annexin V 結合緩沖液 (10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4) 懸浮細胞，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計或流式細胞儀分析

注意事項：1. 根據實際用量取用 JC-1 (200 μM)。未用完的儲存液，避光保存，并避免反復凍融。2. CCCP 為線粒體電子傳遞鏈抑制劑，對人體有害，請注意小心防護。3. Phosphate-buffered saline (10×) 也可 4℃ 保存。4. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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