T4 DNA 快速連接酶
MCE 國際站：T4 DNA Ligase (Fast)
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃，1 年
簡介：MCE T4 DNA Ligase (Fast) 由攜帶 T4 噬菌體的大腸桿菌產生，催化雙螺旋 DNA 或 RNA 中的 5-磷酸基和 3-羥基端之間磷酸二酯鍵的形成。
概述：MCE T4 DNA Ligase (Fast) 由攜帶 T4 噬菌體的大腸桿菌產生，催化雙螺旋 DNA 或 RNA 中的 5-磷酸基和 3-羥基端之間磷酸二酯鍵的形成。可將 DNA 片段與粘性末端或平末端連接，能夠修復雙螺旋 DNA、RNA或 DNA/RNA 雜合體中的單鏈缺口，但對單鏈核酸無活性。適用于標記 RNA 3’- 末端，環化 RNA 和 DNA 寡聚核苷酸及克隆 cDNA 等。反應需要 ATP 作為輔助因子，在室溫下完成粘性末端連接僅需 10 min。操作簡便，可實現快速、高效連接。
描述：
MCE T4 DNA 連接酶（快速）由攜帶 T4 噬菌體的大腸桿菌產生，可催化雙鏈 DNA 或 RNA 中并列的 5'-磷酸和 3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。該酶可連接具有粘性或平末端的 DNA 片段，修復雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交中的單鏈缺口，但對單鏈核酸無活性。它適用于標記 RNA 3' 端、環化 RNA 和 DNA 寡核苷酸以及克隆 cDNA。T4 DNA 連接酶需要 ATP 作為輔因子，在室溫下僅需 10 分鐘即可完成粘性末端連接。操作簡單，連接快速高效。
操作說明：DNA 片段（粘性末端與平末端）與載體 DNA 連接1.設置連接反應體系（冰上操作）注：如果載體進行的是單酶切，須進行酶切后的去磷酸化處理，避免產生較多載體自連的克隆。2.連接體系用移液槍輕輕吹打混勻，瞬離。粘性末端連接體系于 22°C 孵育 10 min，平末端連接體系于 22°C 孵育 1 h。3.取 1-5 μL 連接產物用于 50 μL 化學感受態細胞的轉化或取 1-2 μL 連接產物用于 50 μL 電轉感受態細胞的轉化。注：如果連接產物用于電轉化，應使用離心柱或氯仿抽提純化 DNA 來代替熱失活步驟。線性 DNA 自身環化的連接1.設置連接反應體系（冰上操作）。2.連接體系用移液槍輕輕吹打混勻，瞬離。22°C 孵育 10 min。3.取 1-5 μL 連接產物用于 50 μL 化學感受態細胞的轉化或取 1-2 μL 連接產物用于 50 μL 電轉感受態細胞的轉化。注：如果連接產物用于電轉化，應使用離心柱或氯仿抽提純化 DNA 來代替熱失活步驟。接頭連接雙鏈寡核苷酸連接體通常用于在插入片段中產生粘性末端。連接子通常含有限制性酶識別序列，在連接后消化產生和克隆載體匹配的粘性末端。如果連接子已包含于克隆載體匹配的粘性末端，可隨時與克隆載體連接無需進行插入片段的進一步處理。1.設置連接反應體系（冰上操作）。2.連接體系用移液槍輕輕吹打混勻，瞬離。22°C 孵育 10 min。3.65°C 孵育 10 min 或 70°C 孵育5 min，進行熱失活。注：接頭連接反應可在適合后續消化的限制性酶緩沖液中進行，以簡化“接頭連接-酶切"實驗流程。具體方法為：向接頭連接體系中添加 ATP 至終濃度1 mM，進行接頭連接反應。反應完成后，失活 T4 DNA Ligase (Fast)。最后，在在體系中加入所需內切酶進行酶切。
注意事項：1.Buffer 在融解時，如果出現少量沉淀屬正常現象，請顛倒混勻后使用。2.酶使用時宜存放在冰盒內或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于 -20°C 保存。3.T4 DNA Ligase (Fast) 在濃度高于 200 mM 的 NaCl 或 KCl 中會被強烈抑制。4.連接反應液添加量不應該超過感受態細胞體積的 10%，不推薦體系中加入過量的 T4 DNA Ligase (Fast)。5.T4 DNA 連接酶與 DNA 的結合可能導致瓊脂糖凝膠中發生條帶位移。為避免發生這種情況，可使用 6 × DNA Loading 或 SDS 溶液在 70°C 孵育 5 min 或 65°C 孵育 10 min，在冰上冷卻后進行電泳。6.聚乙二醇 (PEG) 能極大地提高平末端連接的連接效率，PEG 8000 的推薦添加量是連接體系的 5% (w/v)。7.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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