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AF488 NHS ester

MCE 國際站：AF488 NHS ester

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-D1730

CAS：1374019-99-4

存儲條件：請將產品存放在分析證書上推薦的條件下。

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：AF488 NHS ester 是一種胺特異性熒光探針 (Em=525 nm)。AF488 NHS ester 在水和生物樣品中，與巰基和胺反應，并在衍生化后改變它們的化學結構和熒光性質。

生物活性：AF488 NHS 酯是一種胺特異性熒光探針 (Em=525 nm)。 AF488 NHS 酯與水樣和生物樣品中的巰基和胺發生反應，然后在衍生化后改變其化學結構和熒光性質^[1]。體外：AF488 NHS 酯的 IgG 熒光標記和抗 IgG 固相肽庫篩選^[2]
(1) 將凍干免疫球蛋白溶解在 50 mM 磷酸鈉、20 mM 溶液中氯化鈉和 PH 8.3，濃度為 5 g/L。
(2) 將 1 mg AF488 NHS 酯溶解于 100 µL 超干 DMF 中，加入 1 mL (1) 中的溶液，室溫孵育 1 h。
(3) 使用配備 3-kDa MWCO 過濾器的 Amicon Ultra 0.5-mL 離心過濾裝置收集樣品。
(4)將脫保護的六聚體或四聚體文庫用50 mM磷酸鈉、150 mM氯化鈉、PH 7.4(PBS)溶液洗滌，用5×沉降樹脂體積洗滌3次至平衡。
(5) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.2% Tween (PH 7.4) 溶液稀釋 IgG-AF488，直至終濃度為 1.3 mg/mL。
(6) 將(4)和(5)在2-8°C下孵育過夜。
(7) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.1% Tween 20、PH 7.4 (PBS-T) 清洗樹脂珠。
(8) 將樹脂沉積在 40 µL PBS-T 的 96 孔板中，每孔 1 個珠子，然后使用熒光顯微鏡在 10 倍放大倍數下成像。在480 nm激發下，以510 nm發射強度為閾值進行Alexa Fluor 488熒光測量和熒光篩選。
AF488 NHS 酯儲存溶液^[1]
用 DMF 制備 20 mM AF488 NHS 酯。
注意：AF488 NHS酯儲存液建議分裝后-20℃避光保存。

體外：AF488 NHS ester 的 IgG 熒光標記與抗 IgG 固相肽庫篩選[2] (1) 將凍干的 IgG 以 5 g/L 的濃度溶解在 50 mM 磷酸鈉、20 mM 氯化鈉、PH 8.3 的溶液中。 (2) 1 mg AF488 NHS ester 溶于 100 µL extra dry DMF 中，加入 1 mL (1) 中溶液，室溫旋轉孵育 1 h。 (3) 用 Amicon Ultra 0.5-mL 離心式過濾裝置，配有 3-kDa MWCO 過濾器收集樣品。 (4) 六聚體或四聚體去保護文庫在 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、PH 7.4 (PBS) 溶液中以 5× 沉淀樹脂體積洗滌三次以平衡。 (5) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.2% 吐溫 (PH 7.4) 溶液稀釋 IgG-AF488 至終濃度為 1.3 mg/mL。 (6) 將 (4) 和 (5) 在 2-8°C 下孵育過夜。 (7) 用 50 mM 磷酸鈉、150 mM 氯化鈉、0.1% 吐溫 20、PH 7.4 (PBS-T) 洗滌樹脂珠。 (8) 將樹脂在 40 µL PBS-T 的 96 孔板中每孔沉積 1 個珠，然后使用熒光顯微鏡以 10 倍放大率成像。在 480 nm 激發下，以 510 nm 發射強度為閾值進行 Alexa Fluor 488 熒光測量和熒光篩選。 AF488 NHS ester 儲存液[1] 用 DMF 配制 20 mM 的 AF488 NHS ester。 注：AF488 NHS ester 儲存液建議分裝后于 -20°C 避光保存。 MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Kendall CG, et al. Amine Analysis Using AlexaFluor 488 Succinimidyl Ester and Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence. J Anal Methods Chem. 2015;2015:368362.
[2]. Lavoie RA, et al. Targeted Capture of Chinese Hamster Ovary Host Cell Proteins: Peptide Ligand Discovery. Int J Mol Sci. 2019 Apr 8;20(7):1729.