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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1 kit |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | CS-20008-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品介紹
人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒是為在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增人CD34+造血干/前體細(xì)胞而專門(mén)設(shè)計(jì)的一款含血清培養(yǎng)基套裝。該試劑盒可在7天內(nèi)誘導(dǎo)人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增達(dá)~10倍，是研究人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增和功能、以及產(chǎn)生人CD34+造血干/前體細(xì)胞的重要培養(yǎng)系統(tǒng)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
針對(duì)人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增設(shè)計(jì)而成
產(chǎn)品成分
產(chǎn)品名稱 | Catlog# | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 | CS-20008-50 | 1 kit | |
人CD34+造血干/前體細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | CS-20008-B | 50ml | 4℃ |
人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增補(bǔ)充因子 | CS-20008-EXS | 0.5ml | -20℃ |
預(yù)篩選造血干/前體細(xì)胞專用胎牛血清 | CS-HSCF-5 | 5ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分
人CD34+細(xì)胞磁珠分選試劑
MS5基質(zhì)細(xì)胞
*培養(yǎng)基配制
(在無(wú)菌生物安全柜中，開(kāi)展以下操作)
1.在4℃冰箱解凍補(bǔ)充因子和胎牛血清，混勻后使用。
注：解凍后的補(bǔ)充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1個(gè)月內(nèi)使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復(fù)凍融！2.擴(kuò)增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴(kuò)增補(bǔ)充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，得到人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基。如取100ul補(bǔ)充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以此類推。
注：配好的*培養(yǎng)基請(qǐng)于4℃保存，且于1個(gè)月內(nèi)使用完畢。使用說(shuō)明
(請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說(shuō)明后再開(kāi)始相關(guān)實(shí)驗(yàn))
1.D0：收集培養(yǎng)的MS5細(xì)胞，使用含10ng/ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至＜1*10^7/ml，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃，5% CO2，孵育3小時(shí)。
2.使用20ml含有2.5%血清的PBS緩沖液*清洗MS5細(xì)胞
3.重復(fù)步驟2.
4.使用MS5培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為2.5*10^5/ml，按照如下表格鋪于培養(yǎng)板，過(guò)夜培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁：
培養(yǎng)板 | MS5培養(yǎng)基體積 | MS5細(xì)胞數(shù)/孔 |
96孔板 | 0.1ml | 2.5*10^4 |
24孔板 | 0.5ml | 1.25*10^5 |
5.D1：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞（參考所使用試劑盒的說(shuō)明書(shū))，計(jì)數(shù)。
注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細(xì)胞。
6.使用擴(kuò)增培養(yǎng)基重懸CD34+造血干/前體細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示將細(xì)胞鋪于培養(yǎng)板（鋪板之前去除MS5培養(yǎng)基）：
培養(yǎng)板 | 擴(kuò)增培養(yǎng)基體積 | CD34+造血干/前體細(xì)胞數(shù)/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 1.0*10^4 |
24孔板 | 0.1ml | 5.0*10^4 |
7.將培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃，5%CO2，靜置培養(yǎng)。
8.D3：半量換液。小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基，補(bǔ)充加入新鮮擴(kuò)增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟6表格）。
注：*培養(yǎng)基請(qǐng)恢復(fù)至室溫后使用，減少對(duì)細(xì)胞的刺激；9.D6：半量換液，同步驟8.
10.D7：輕輕吹打細(xì)胞，收集懸浮細(xì)胞，即為擴(kuò)增的人CD34+造血干/前體細(xì)胞，可進(jìn)行后續(xù)操作和分析。
注：此步驟需輕柔吹打細(xì)胞，以免MS5基質(zhì)細(xì)胞脫落。一般來(lái)說(shuō)，MS5基質(zhì)細(xì)胞貼壁牢固，輕柔吹打不會(huì)導(dǎo)致MS5脫落，操作人員可在顯微鏡下觀察確認(rèn)MS5脫落情況。數(shù)據(jù)展示
圖：人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴(kuò)增鑒定。磁珠分選的人CD34+造血干/前體細(xì)胞按照上述說(shuō)明培養(yǎng)7天后，進(jìn)行表型鑒定及擴(kuò)增倍數(shù)鑒定。
