細胞培養是生物醫學研究中的基礎技術之一，但在實際操作中，常常會遇到各種問題。以下將結合我搜索到的資料，詳細列舉細胞培養過程中常見的問題及其解決辦法。
1. 培養液pH值變化過快
原因：CO?張力不正確、瓶蓋過緊、碳酸氫鹽緩沖不足、鹽濃度不正確或細菌/真菌污染。
解決辦法：調整CO?濃度、松開瓶蓋1/4圈、增加HEPES緩沖液濃度、使用正確的鹽和培養基、丟棄污染的培養物并嘗試凈化。
2. 培養液中出現沉淀
原因：殘留磷酸鹽、冰凍保存導致沉淀、細菌/真菌污染。
解決辦法：用去離子水反復沖洗玻璃器皿并除菌，或加熱培養液至37℃并搖動使其溶解，若沉淀仍存在則丟棄培養液。
3. 細胞不貼壁
原因：胰蛋白酶消化過度、支原體污染、培養液中缺乏貼壁因子。
解決辦法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低濃度、清潔支架或培養箱、調整培養液成分。
4. 懸浮細胞成簇
原因：培養液中鈣、鎂離子含量高、支原體污染、蛋白酶過度消化。
解決辦法：使用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞、分離培養物并檢測支原體、用DNase I處理細胞。
5. 細胞生長緩慢
原因：培養基配方不當、血清質量差、細胞傳代次數過多、細胞老化、支原體污染。
解決辦法：更換新鮮培養基、補充谷氨酰胺及生長因子、使用無抗生素培養液、增加接種細胞濃度、換用新的保種細胞。
6. 細胞死亡
原因：培養箱內無CO?、溫度波動大、細胞損傷、培養液滲透壓不正確、有毒代謝產物堆積。
解決辦法：檢測并調整培養箱內CO?和溫度、更換保存細胞種、檢測培養液滲透壓、換入新鮮培養液。
7. 細胞污染
原因：細菌、真菌、支原體或病毒污染。
解決辦法：丟棄被污染的細胞并消毒培養環境、使用優質血清、避免反復凍融。
8. 細胞復蘇后無活細胞
原因：細胞凍存不當、復蘇方法不當、復蘇培養基不合適、細胞稀釋過度。
解決辦法：新取一只凍存細胞并儲存在液氮中、按照供應商推薦的操作程序凍存細胞、使用供應商推薦的培養基、避免渦旋振蕩或用力敲打培養瓶
9. 細胞復蘇后貼壁不良
原因：低濕度導致靜電積累、消化過度、支原體污染。
解決辦法：增加室溫濕度、使用防靜電裝置、調整消化條件、檢測并清除支原體。
10. 細胞生長不均勻
原因：細胞或培養基混合不足、沖擊式細胞生長不均、培養箱內溫度波動。
解決辦法：插入細胞后輕輕搖晃混合、使用搖床時保持連續穩定的振幅和頻率、調整培養箱溫度。
11. 細胞形態異常
原因：消化過度、培養基成分改變、長期繼代篩選結果。
解決辦法：調整消化時間、更換培養基、觀察細胞狀態。
12. 細胞凍存不當
原因：凍存液質量差、凍存方法不當、存儲不當、解凍方法不當。
解決辦法：遵循供應商建議的緩慢冷凍、使用合適的細胞保護劑、快速解凍并使用預熱培養基。
13. 血清保存與使用問題
原因：血清保存不當、血清解凍方法不當、熱滅活血清影響質量。
解決辦法：建議在-5℃至-20℃保存，避免4℃超過一個月，分裝后冷凍；逐步解凍，均勻搖晃，避免長時間置于37℃。
14. 細胞計數與存活率問題
原因：細胞計數方法不準確、DMSO毒性、滲透壓傷害。
解決辦法：使用臺盼蘭計數活細胞、立即去除DMSO、預熱培養基、快速解凍。
15. 細胞傳代操作不當
原因：消化過度、傳代比例錯誤、離心過度。
解決辦法：控制消化時間、調整傳代密度、輕柔操作
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