Roche 12156792910 原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅
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Roche 12156792910 原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅，產品簡介：
產品品牌：Roche
產品貨號：12156792910
產品名稱：原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅
產品規格：50 tests
產品說明：
說明
一般描述
廣泛使用的方法用于確定凋亡，包括基于瓊脂糖凝膠電泳的基因組DNA分析以及基于3H-胸苷或5-溴-2′-脫氧-尿苷的DNA片段檢測。該方法包含在特定的細胞群中將片段化的低分子量DNA與未片段化的高分子量DNA進行分離。因此，這些方法并不提供關于在特定細胞群或特別是組織切片中某個獨立細胞命運的信息。或者，獨立的凋亡細胞可能因其特征性的核染色質堆疊和片段而可通過顯微鏡進行識別，但這種方法具有主觀性并受限于形態發生最大變化這一相對窄的時間窗口。
凋亡的標志是DNA的降解，而這在早期是對核小體間DNA連接體區域是有選擇性的。DNA的切割可能會產生雙鏈和單鏈的DNA斷裂（切口）。兩種類型的斷裂都可在酶促反應中利用修飾的核苷酸（如生wu素-dUTP、DIG-dUTP、熒光素-dUTP）的游離3′-OH端標記而被檢測到。這些酶末端轉脫氧核苷酰酶（TdT）可催化脫氧核糖核苷酸的模板非依賴性聚合至單鏈及雙鏈DNA的 3′-末端。這種方法也被稱之為TUNEL(TdT-介導的 dUTP-X缺口 末端標記)。或者，游離的3′-OH基團可能通過一種稱為切口翻譯的模板依賴機制而利用DNA聚合酶被標記。然而，TUNEL法被視為更為敏感且快速的。
樣品材料：位于懸浮液、細胞離心涂片器以及細胞涂片制品中的細胞，生長于玻片上的粘附細胞以及冷凍和石蠟包埋的組織切片。
原理
原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅是基于在凋亡的早期對單鏈和雙鏈DNA的斷裂進行檢測。
凋亡的細胞是經過固定和通透化處理的。隨后，這些細胞采用含有TdT以及TMR-dUTP的TUNEL反應混合物進行孵育。在孵育階段，TdT可催化在單鏈和雙鏈DNA的游離3′-OH基團上加上TMR-dUTP。在洗滌后，在DNA受損位點插入的標記可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行可視化。
試劑盒用于利用熒光顯微鏡和流式細胞儀在單細胞水平對凋亡性細胞死亡進行檢測和定量，以及用于利用熒光素標記的細胞標志物（TMR紅）進行雙標記。
特異性
TUNEL反應傾向于對在凋亡過程中產生的DNA鏈斷裂進行標記。這能夠將凋亡與壞死以及由細胞增殖抑制藥物或放射誘導的初級DNA鏈斷裂進行區分。
應用
原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅已用于末端脫氧核苷酸轉移酶生wu素-dUTP切口末端標記（TUNEL）檢測。[1][2]它已用于凋亡檢測。[3][4]
精準、快速而簡單的技術，用于利用熒光顯微鏡和流式細胞儀對帶有紅色熒光標記的細胞和組織在單細胞水平對凋亡的DNA片段進行檢測和定量。[5][6]
包裝
1個試劑盒包含2種組分。
制備說明
工作濃度：酶濃度
最佳的酶濃度范圍在單個檢測0.5至5 U。對于標準的50 μl PCR，我們建議使用2 U的酶混合物。
工作溶液：將全部體積（50 μl）的酶溶液加入至剩下的450 μl標記溶液以獲得500 μl TUNEL反應混合物。
充分混合以平衡組分。
儲備條件 (工作溶液)：TUNEL反應混合物應當在立即使用前進行制備而不應當進行儲備。將TUNEL反應混合物置于冰上直至使用。
TUNEL反應混合物通過將酶融合和標記溶液在使用前混合而制備。
產品訂購信息：
Roche 12156792910 原位細胞死亡檢測試劑盒，TMR紅 50 tests
