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生化培養箱對雞胚背根神經節組織塊的培養
主要用于神經生長因子(NGF)等神經營養因子的生物活性測定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經突起的生長長度和密度為指標半定量評估NGF的活性。
1、材料和方法
(1)選正常受精的雞蛋，置于37℃生化培養箱內孵化，每日翻動雞蛋一次。
(2)取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼，從氣室端敲開蛋殼，用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。
(3)用彎鑷鉤住雞胚頸部，無菌條件下取出雞胚置小平皿內，除去頭部后，腹側向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開胸腹腔，除去內臟器官。
(4)在解剖顯微鏡下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其兩側，在椎間孔旁可見到沿脊柱兩側排列的背根節(圖1)，用一對5號微解剖鑷小心取出。
(5)置背根節于解剖溶液內，用微解剖鑷去除附帶組織，接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養瓶中，在DMEM 無血清培養液中培養。
2、結果
雞胚背根神經節在含神經生長因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的無血清培養液中培養24 h,神經節長出密集的神經突起。而未加NGF的神經節培養24 h, 未見神經突起生長。