NobleRyder R0898 柱式超純動(dòng)物RNA小提試劑盒Spin HiPure Animal RNA Mini Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：R0898

產(chǎn)品名稱：柱式超純動(dòng)物RNA小提試劑盒Spin HiPure Animal RNA Mini Kit

英文名稱：Spin HiPure Animal RNA Mini Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T

柱式超純動(dòng)物RNA小提試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder R0898柱式超純動(dòng)物RNA小提試劑盒Spin HiPure Animal RNA Mini Kit

本產(chǎn)品利用RNA在特定緩沖體系下能夠高效結(jié)合硅基質(zhì)材料的原理，采用硅膠膜離心吸附柱，適用于從培養(yǎng)細(xì)胞和動(dòng)物組織中提取總RNA，可以有效提取分子量大于200nt的RNA。提取過(guò)程中，無(wú)需使用苯fen氯仿等，采用DNase柱上處理，che底去除基因組DNA殘留，提取的RNA樣品經(jīng)PCR檢測(cè)不含基因組DNA，且極少含蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)的污染。本產(chǎn)品操作簡(jiǎn)單快速，且提取的RNA純度高，可直接用于RT-PCR、Northernblot、構(gòu)建cDNA文庫(kù)等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

自備材料：β-巰基乙醇、無(wú)水乙醇

1、Buffer RA 可能會(huì)形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請(qǐng)于60℃加熱溶解，然后待恢復(fù)至室溫后使用。

2. 操作前請(qǐng)根據(jù)樣品數(shù)量，按照1mlBufferRA中加入10μlβ-巰基乙醇的比例，配制裂解液。建議該裂解液現(xiàn)用現(xiàn)配。若配好的裂解液沒(méi)有用完，可在4℃保存1個(gè)月。

3. 首ci使用，請(qǐng)?jiān)贐ufferRW2中加入48ml無(wú)水乙醇，并做好標(biāo)記。

操作步驟（僅供參考）：

1. 細(xì)胞或組織的裂解

1) 貼壁細(xì)胞：

che底吸棄培養(yǎng)液，按照每6-10cm2面積加入600μlBufferRA（使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇），用移液器吹打3-5次使細(xì)胞裂解。少于6-10cm2面積加入350μlBufferRA。

2) 細(xì)胞懸液：

500×g 離心收集細(xì)胞，che底吸棄培養(yǎng)液，每5×106-1×107細(xì)胞加入600μlBufferRA（使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇），用移液器吹3-5次使細(xì)胞裂解。少于5×106細(xì)胞加入350μlBufferRA。

3) 動(dòng)物組織：

取600μl Buffer RA（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入β-巰基乙醇）加入到1.5ml離心管中。組織樣品經(jīng)液氮研磨后，將研磨成粉末狀的樣品（20-30mg）加入到上述1.5ml離心管中，劇烈震蕩混勻直至裂解液中無(wú)明顯沉淀。若組織樣本低于20mg，則加入350μlBufferRA。

2. 向上述組織裂解混合物中加入590μlNuclease-freeWater(DEPC-treated)和 10μlProteinase K，混勻后56℃孵育10-20min。

3. 12,000 rpm 離心 2min，小心吸取管中的上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中，盡量避免觸及管中的細(xì)胞碎片沉淀。

4. 緩慢加入0.5倍上清液體積的無(wú)水乙醇，混勻（此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀），將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入SpinColumnswith Collection Tubes-RC（吸附柱放在收集管中），12,000rpm離心30s，棄除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

5. 向吸附柱中加350μlBufferRW1，12,000rpm離心30s，棄除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

6. 配制RNase-free DNase 工作液：取10μlRNase-free DNase，加入至新的RNase-free 離心管中，加70μl Buffer DB，混合均勻，配制成終體積為80μl的RNase-freeDNase工作液。

7. 向吸附柱中央加入80μlRNase-freeDNase工作液，室溫放置15min。

8. 向吸附柱中加入350μlBufferRW1，12,000rpm離心30s，棄除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

9. 向吸附柱中加入500μlBufferRW2（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12,000rpm離心30s，棄除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

10. 重復(fù)操作步驟9一次。

11. 將吸附柱放回收集管中，室溫12,000rpm離心3min。

注：此步驟十分重要，否則BufferRW2中殘留的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

12. 將吸附柱放入一個(gè)新的1.5ml 離心管（DNase/RNase-free），加入50-100μlBufferTB，室溫放置1-2min，12,000 rpm 離心1min，得到RN溶液。所得的RNA應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

1． 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。

2． 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

柱式超純動(dòng)物RNA小提試劑盒 質(zhì)粒提取 

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