6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

6-磷酸葡萄糖脫氫酶G6PDH試劑盒 輔酶Ⅱ

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內酯，同時將 NADP+還原為NADPH，供生物合成及維持細胞內的還原狀態用。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。

測定原理：

G6PDH 催化NADP+還原生成NADPH，在 340 nm 下測定 NADPH 增加速率。

組成：

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 1000~5000：1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

3、在 1ml 石英比色皿中加入 50μl 樣本和 950μl 試劑一，混勻后立即記錄 340nm 處 1min 后吸光值A1 和

6min 后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

注意：若ΔA 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數?；驅⒎磻獣r間縮短至 2min，使A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。

G6PDH 活力單位的計算：

1、血清（漿）G6PDH 活力的計算:

單位的定義：每 ml 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=643×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 G6PDH 活力的計算:

按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W

按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.3215×ΔA

V 反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000 萬。

6-磷酸葡萄糖脫氫酶G6PDH試劑盒 輔酶Ⅱ