土壤堿性蛋白酶（Solid - Alcalase Protease，S-ALPT）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

土壤堿性蛋白酶試劑盒正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化，其水解產物是高等植物的氮源之一。S-ALPT 在堿性環境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。

測定原理：

堿性條件下，S-ALPT 可將酪蛋白水解產生酪an酸；在堿性條件下，酪an酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在 680nm 有特征吸收峰。

試劑組成和配置：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 6ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2ml 試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入 8ml；

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 40ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；試劑六：液體 1.5ml×1 支，0.05mg/ml 標準酪an酸溶液；4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

土壤堿性蛋白酶試劑盒測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 680nm，蒸餾水調零。

2、試劑二、三和四 40℃水浴 10min。

3、樣本測定。

混勻，40℃水浴 20min，8000g 25℃離心 10min，取上清液，680nm 下讀取各管吸光值A

注意事項：

標準管只需測一次。每個測定管設一個對照管。

S-ALPT 活性計算：

單位定義：每天每g 土樣中產生 1mg 酪an酸為一個 S-ALPT 活力單位。

S-ALPT(mg/d/g 土樣)=C 標準×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管×V 反總÷W÷T=24×(A 測定管-A 對照管)÷A 標準管。

C 標準管：標準管濃度，0.05mg/ml；V 反總：反應體系總體積，0.4ml；T：反應時間，30min=1/48d；

W：樣本質量，0.04g。