土壤羥胺還原酶（hydroxylamine reductase,HR）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

土壤羥胺還原酶試劑盒 土壤系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產物羥胺還原為氨，土壤中的還原態化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發損失，間接影響氮肥的利用效率。

測定原理：

硫酸鐵銨中的Fe³⁺可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為 Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在 510nm 處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm 處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 4ml 蒸餾水充分溶解。

自備儀器和用品：

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀、氮吹儀。

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

測定操作表：

計算公式：

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.185x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉化 1μg 羥胺為一個酶活力單位。

HR 活性（μg/d /g 土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.185×V 反總÷W÷T

= 36.32×（△A+0.1828）÷W

使用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0925x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉化 1μg 羥胺為一個酶活力單位。

HR 活性（μg/d /g 土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.0925×V 反總÷W÷T

=72.64×（△A+0.1828）÷W

V 反總：加入提取液體積，0.28ml；W：樣本質量，g；T：1/24h

注意事項：

土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層 5cm 以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。

反應體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于 30℃反應 1h。

土壤羥胺還原酶試劑盒 土壤系列