肝酯酶（Hepatic lipase，HL）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

肝酯酶試劑盒 脂肪酸系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質細胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內皮細胞表面和竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面，可促進脂蛋白中的膽gu醇向類固醇激素轉化，血漿中的 HL 活性增高時，血漿中小顆粒可導致LDL 水平升高，加速動脈粥樣硬化的發生。

測定原理：

肝酯酶水解α-乙酸萘酯產生α-萘酚，可與固藍 B 鹽形成紫紅色偶氮化合物，在 595nm 有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內與肝酯酶活性成正相關。

組成：

自備儀器和用品：

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。

樣品處理：

組織：按照質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。

細胞：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。

血清：直接測定。

測定操作：

計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994

按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷W

按照細胞數量計算

酶活性定義：每 104 個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷（V 樣×細胞數量÷V 樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷細胞數量

按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μmol

/min/ml）=（△A+0.1241）÷0.1519×V 反總÷V 樣÷T

= 6.58×（△A+0.1241）

V 反總：反應總體積，0.2ml；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994

按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。 HL 活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷W

按照細胞數量計算

酶活性定義：每 104 個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL 活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷（V 樣×細胞數量÷V 樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷細胞數量

按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產生 1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL 活性（μmol

/min/ml）=（△A+0.1241）÷0.076×V 反總÷V 樣÷T

= 13.16×（△A+0.1241）

V 反總：反應總體積，0.2ml；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.02ml；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min

肝酯酶試劑盒 脂肪酸系列