尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶試劑盒 糖原

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將 1-磷酸葡萄糖與UTP 分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）。

測定原理：

UGP 可逆催化反應生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將 NADP轉化為NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了UGP 活性。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 2ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板

酶液提取：

組織：按照質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。

細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置冰上待測。

液體：直接檢測。

測定操作：

紫外分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μl 試劑一，20μl 試劑二，20μl 試劑三，20μl 試劑四，20μl試劑五，20μl 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 30s 的吸光值A1 和 330s 的吸光值A2，△A=A2-A1

計算公式：

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

按照細胞數量計算

酶活單位定義：每 104 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細胞數量÷V 樣總) ÷T

=321.54×ΔA÷細胞數量

按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=321.54×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g

使用 96 孔板測定的計算公式如下

按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

按照細胞數量計算

酶活單位定義：每 104 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細胞數量÷V 樣總) ÷T

=643.08×ΔA÷細胞數量

按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=643.08×ΔA

V 反總：反應體系總體積，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g

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