諾博萊德 2×Pfu PCR Master Mix（含染料）

2× PFU PCR Master Mix(含染料)

目錄號：71111

產品內容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。經常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個月。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

本產品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液，濃度為2×。 保真度是Taq酶的54倍，用于高保真PCR反應、復雜模板如GC含量高(>60%)， 有二級結構等的擴增和大規模的基因檢測。

PCR產物為平末端，純化后可直接用于Blunt載體克隆（Cat#V116、 V117）。

本產品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、測序等后續操作。

適用范圍：

高保真DNA擴增:如表達基因的克隆、基因的定點突變、細胞內基因點突變的分析(SNP)和末端補平。

基因檢測：適合大規模基因檢測，半定量PCR實驗和微量DNA的檢測。

產品特點

具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點，可最大限度的減少人為誤差。

{C}2   × Pfu PCR Master Mix 使用說明：

一、配制 PCR 反應體系：(于冰上配制)

參考模板用量（50 μl 反應體系）：

質粒：0.1-10 ng；細菌基因組：10-100 ng；人類基因組：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。

二、建議 PCR 循環條件：

注意：如果擴增片段≤4 kb，建議延伸速度為 1kb / min；片段＞4 kb，建議 0.5kb / min。

注意事項：

a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶擴增時延伸速度比Taq酶低，應根據擴增產物的長度設置相應的延伸時間，如果擴增片段小于4 kb，建議Pfu酶的延伸速度為1kb/ min；如果擴增片段大于4 kb，建議延伸速度為0.5kb / min。同時Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以應先加dNTP后，再加Pfu酶到反應體系中，并立即進行PCR反應。

b. 用Pfu酶擴增時，引物的純度要求較高，引物長度大于18個堿基，Tm在55－80℃ 之間，引物濃度在0.1-0.5 μM之間，比Taq酶略高。

c. Pfu酶的熱穩定性比Taq酶好，對于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，對Pfu酶的活性無影響。

三、結果檢測：反應結束后取 5 µl 反應產物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2×Pfu PCR Master Mix（含染料）