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北京諾博萊德科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第1年

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高效sgRNA體wai轉(zhuǎn)錄試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)91615

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-07-17 19:10:43瀏覽次數(shù):189次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 25次/50次
貨號(hào) 91615 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和育種研究等領(lǐng)域的常用手段。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯,其中Cas9蛋白是通用組分(無需修改),sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點(diǎn)來設(shè)計(jì)和轉(zhuǎn)錄。
高效sgRNA體wai轉(zhuǎn)錄試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄

FlashPure sgRNASynthesis Kit

高效 sgRNA 體wai轉(zhuǎn)錄試劑盒

 

高效sgRNA體wai轉(zhuǎn)錄試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄


目錄號(hào):91615

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

91615-25

25 rxns (20 μl/rxn)

91615-50

50 rxns (20 μl/rxn)

2×PCR Mix

250 μl

500 μl

Primer Mix

50 μl

100 μl

NTPs

200 μl

400 μl

10×Reaction Buffer

50 μl

100 μl

T7 Enzyme Mix

50 μl

100 μl

DNase I

25 μl

50 μl

Buffer MRC

5 ml

10 ml

Wash Solution 1

6 ml

12 m

Wash Solution 2/3

5 ml

10 ml

RNase-Free H2O

5 ml

10 ml

sgRNASpinColumnWithCollectionTubes

25 

50 

保存條件: -20℃保存,有效期 12 個(gè)月。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品簡(jiǎn)介

CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)是現(xiàn)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和育種研究等領(lǐng)域的常用手段。該技術(shù)體系僅需要Cas9蛋白和sgRNA即可實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯,其中Cas9蛋白是通用組分(無需修改),sgRNA則需要根據(jù)不同靶位點(diǎn)來設(shè)計(jì)和轉(zhuǎn)錄。

高效sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒采用T7 RNA聚合酶復(fù)合物高效轉(zhuǎn)錄spCas9sgRNA。試劑盒中的反應(yīng)體系根據(jù)sgRNA特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化,每個(gè)反應(yīng)可在4小時(shí)內(nèi)(實(shí)際操作為半天或1天之內(nèi))獲得多達(dá)100~200μgsgRNAsgRNA可直接用Cas9蛋白體外切割,純化后可用于細(xì)胞注射等實(shí)驗(yàn)。

試劑盒中配備了合成sgRNA轉(zhuǎn)錄模板,sgRNA轉(zhuǎn)錄所需的全部試劑,用戶僅需要合成含有1CRISPR靶點(diǎn)的引物就能完成sgRNA體外轉(zhuǎn)錄。

操作步驟:

1. 設(shè)計(jì)PCR正向引物,替換標(biāo)紅的N(20)即可:

Primer Target5’TAATACGACTCACTATAGGN(20)GTTTTAGAGCTAGAAATA -3’

注:spCas9識(shí)別的靶點(diǎn)為20nt,共20個(gè)堿基序列,N(20)為靶位點(diǎn)不包含PAM20個(gè)堿基序列,建議避免選擇有3個(gè)(或3個(gè)以上)連續(xù)T堿基的位點(diǎn)。

2. 找公司合成Primer Target,稀釋到 1mM 濃度備用。

3. 配制PCR反應(yīng)體系:

 

 

Components

Volume (20μl)

2×PCR Mix

10 μl

Primer Mix

2 μl

Primer Target1mM

0.4 μl

ddH2O

7.6 μl



4. 制備體外轉(zhuǎn)錄模板,設(shè)置反應(yīng)程序如下:

 

5. 按下表配制sgRNA轉(zhuǎn)錄體系,37℃反應(yīng)4 hours(操作過程中采用無RNA酶耗材)

Components

Volume (20μl)

NTPs

8 μl

PCR productas template

8 μl

10×Reaction Buffer

2 μl

T7 Enzyme Mix

2 μl

6. (可選步驟在反應(yīng)體系中加入1 μLDNase I 37℃孵育 15 min,消化轉(zhuǎn)錄的DNA模板。

7. 過柱純化:

提示:第一次使用前請(qǐng)先在 Wash Solution 1 瓶和 Wash Solution 2/3 瓶中加入無水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽,并做好標(biāo)記。sgRNA 容易降解,全程使用無酶耗材,請(qǐng)小心操作、避免降解。

1)于冰上,用 RNase-Free H2O 將 RNA 樣品補(bǔ)足至 100 μL, 加入 200 μL Buffer MRC,輕柔混勻。

2)加入 375 μL1.25 倍體積)無水乙醇并混勻。

3)將上一步所得溶液加入一套吸附柱中,13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液,將吸附柱重新套回收集管。

4)加入 700 μl Wash Solution 1(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙 醇),13,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液。

5)漂洗:加入 500 μl Wash Solution 2/313,000 rpm 離心 30 sec,棄濾液。

6)二次漂洗:重復(fù)步驟(5)一次。

7)干燥:將離心吸附柱于 13,000 rpm 離心 2 min,甩干殘留的漂洗液。

8)洗脫:將吸附柱放入一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中,在吸附膜的中央懸空滴加 10 ~ 40 μl RNase-Free H2O,室溫放置 2 min13,000 rpm 離心 1 min,收集 sgRNA,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。


高效sgRNA體wai轉(zhuǎn)錄試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄


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