維生素 B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維sheng素，在生物體能量代謝中有重要的作用。

測(cè)定原理：

VB1 在堿性條件下還原鐵氰hua鉀生成亞鐵氰hua鉀，亞鐵氰hua鉀與 Fe³⁺在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在 704nm 有特征吸收峰。

維生素 B1試劑盒  常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

樣本處理：

1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30min）。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定。

3. 血清：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.017x+0.0031，R² = 0.9991；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測(cè)定管-A 空白管）

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VB1 含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB1 含量（μg/10⁴ cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017

= 58.8×（△A-0.0031）

V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g b．用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測(cè)定管-A 空白管）

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VB1 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr

= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V 樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB1 含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.0085

= 117.65×（△A-0.0031）

V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1. 若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò) 2，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再重新測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.1-10μg/ml。

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