當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>P450系列檢測試劑盒>> DA6010細胞色素b5含量測定試劑盒 P450系列
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/96S |
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貨號 | DA6010 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
主要用途 | 細胞色素b5含量測定試劑盒 |
細胞色素b5(Cytochrome b5)含量測定試劑盒說書
微量法 100T/96S
細胞色素P450 酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。細胞色素 P450 和細胞色素b5 是P450 酶系的兩個血紅素蛋白,其比值的變化與 P450 代謝活性密切相關。
氧化型細胞色素 b5 經連二亞硫酸鈉還原后,在 424nm 處有最大吸收峰,通過測定 424nm 和 490nm 處吸光值的差異,即可計算出細胞色素b5 的含量。
產品名稱 | DA6010-100T/96S | Storage |
試劑一:粉劑 | 2 瓶 | 4℃ |
試劑二:液體 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三:粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑一:粉劑×2 瓶,4℃保存。臨用前各加 100ml 蒸餾水,充分溶解。
臨用前配制,戴一次性手套,小心打開試劑三瓶蓋,加試劑二 20ml 充分溶解,4℃避光可保存 1 周。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
普通離心機,超速離心機、可調式移液槍、紫外分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
1、除去細胞核,線粒體等大分子物質:稱約 0.5g 組織,加入 1ml 試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心 30min,取上清液,轉入超速離心管中。
2、粗制微粒體:100 000g,4℃離心 60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質:向步驟 2 的沉淀中加 1ml 試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g 離心 30min,棄上清液。
4、待測液:向步驟 3 的沉淀中加試劑二 0.5ml,蓋緊后充分震蕩溶解,即待測液,該待測液需當天測定。
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min。
2. 工作液置于 25℃水浴中預熱 30 min。
3. 空白管:取 1ml 玻璃比色皿,加入 10 μl 蒸餾水,200μl 工作液,室溫靜置 2 min,424nm 和 490nm 處吸光值,424nm 處吸光值記為A 空白管 1,490nm 處吸光值記為A 空白管 2。△A 空白管= A 空白管 1- A 空白管 2
4. 測定管:取 1ml 玻璃比色皿,加入 10 μl 待測液,200μl 工作液,室溫靜置 2 min,424nm 和 490nm 處吸光值,424nm 處吸光值記為A 測定管 1,490nm 處吸光值記為A 測定管 2。
△A 測定管= A 測定管 1- A 測定管 2。
注意:只需要做一個空白管。
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1) 按蛋白濃度計算
細胞色素b5 含量(nmol/mg prot) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)
= 122.8×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2) 按樣本質量計算
細胞色素b5 含量(nmol/g 鮮重)= (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×(V 樣總÷V 樣)÷W
= 61.4×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
ε:還原型細胞色素b5 納摩爾消光系數,171×10-6 L/nmol/cm;d:比色皿光徑(cm),1cm; V 反總:反應體系總體積,210 μl =2.1×10-4 L;Cpr:待測液蛋白質濃度(mg/ml),需要另外測定;V 樣:加入反應體系中待測液體積,10 μl=0.01 ml;V 樣總:待測液總體積,0.5 ml;W:樣品質量(g)。
b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下
(1) 按蛋白濃度計算
細胞色素b5 含量(nmol/mg prot) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)
= 245.6×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2) 按樣本質量計算
細胞色素b5 含量(nmol/g 鮮重)= (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×(V 樣總÷V 樣)÷W
= 122.8×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
ε:還原型細胞色素b5 納摩爾消光系數,171×10-6 L/nmol/cm;d:96 孔板光徑(cm),0.5cm; V 反總:反應體系總體積,210 μl =2.1×10-4 L;Cpr:待測液蛋白質濃度(mg/ml),需要另外測定;V 樣:加入反應體系中待測液體積,10 μl=0.01 ml;V 樣總:待測液總體積,0.5 ml;W:樣品質量(g)。
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