目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 逆轉錄試劑盒
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-1762 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Reverse Transcription Kit |
| 保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產品簡介：
本試劑盒提供合成 cDNA 第一鏈（逆轉錄）所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）以 RNA 為模板，高效合成 cDNA。
產品特點：
1.使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低，使得在逆轉錄過程中 RNA 模板不容易被降解，得到的 cDNA 平均長度更長。
2.最長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3.可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4.總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5.得到的 cDNA 可用于后續的 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
6.本產品足夠 50 次 20 ?L 體系的逆轉錄反應。
7.逆轉錄試劑盒只能用于科研。
產品參數：
產品規格
50次
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑
無
使用方法：
一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 在一干凈的反應管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因組 DNA 污
染。
RNA 模板種類加入量
總 RNA100-500 ng
或 poly(A) mRNA10-500 ng
或專一的 RNA
2.加入引物和水
0.01 pg-500 ng
引物種類加入量
Oligo (dT)12-18，0.5 ?g/?L1 ?L
或隨機引物(6 堿基，無-修飾)，
0.2 ?g/?L1 ?L
或 RNA 模板專一性引物15-20 pmol
注意：隨機引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平
均長度成反比。
3.加水到 13 ?L 。
4.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴，此步可以打開 RNA 的二級結構。
5.再加入 5 ?L 4×RT Buffer（含 dNTP）。
6.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。但如果使用隨機引物，由于其很短，則改成 25℃ 5 分鐘以便其跟RNA 結合。
7.加入 1 ?L MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20 ?L。
8.42℃保溫 60 分鐘。但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，待合成了一段 cDNA 后，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為PCR 模板使用，不需要純化。
二：合成建文庫用的 1st-strand cDNA
1.在一干凈的反應管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因組 DNA 污染。
2.加入引物
引物種類加入量
Oligo (dT)12-18，0.5 ?g/?L1 ?L
或隨機引物(6 堿基，無-修飾)
0.2 ?g/?L1 ?L
或 RNA 模板專一性引物100 pmol
注意：隨機引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。
3.加水到 13 ?L。
4.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴，此步可以打開 RNA 的二級結構。
5.再加入 5 ?L 4×RT Buffer（含 dNTP）。
6.37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5
分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘。
7.加入 2 ?L MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20 ?L。
8.42℃保溫 60 分鐘，但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃長期保存。
選擇我們的逆轉錄試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！
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