使用ThermoFisher Lumina熒光分光光度計(jì)測量生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移

分子之間的能量轉(zhuǎn)移大多是由輻射導(dǎo)致的。然而當(dāng)不同熒光物質(zhì)非常靠近時(shí)（<10nm），會發(fā)生共振能量轉(zhuǎn)移（RET）。熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是一種典型的 RET現(xiàn)象。
在 FRET 中，使用強(qiáng)光照射以激發(fā)供體能量，處于激發(fā)態(tài)的供體將一部分或全部能量轉(zhuǎn)移給受體，受體被激發(fā)。如果受體熒光量子產(chǎn)率為零，則發(fā)生能量轉(zhuǎn)移熒光熄滅；如果受體也是一種熒光發(fā)射體則呈現(xiàn)出受體的熒光。光照下很多熒光物質(zhì)會逐漸失去其熒光特性，這種現(xiàn)象被稱為光漂白。為了提高靈敏度，近期生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）得到了廣泛應(yīng)用1。BRET使用生物發(fā)光物質(zhì)代替了熒光供體。由于BRET不在需要直射光線以激發(fā)供體，不存在放射性的能量轉(zhuǎn)移，所以避免了對樣品的害。
熒光素酶是一種螢火蟲體內(nèi)的生物發(fā)光酶，被廣泛用于 BRET研究2。本實(shí)驗(yàn)中，選擇Luc8（海腎熒光素酶）作為供體，該物質(zhì)由海腎（Renillareinformis）基因突變而來。Luc8 的生物
熒光峰值接近480nm。