一、樣品制備問(wèn)題
大多數(shù)流速問(wèn)題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。比如樣品渾濁，離心過(guò)濾不充分導(dǎo)致上樣時(shí)候篩板堵塞，或者是樣品本身的蛋白等大分子物質(zhì)未經(jīng)過(guò)充分的處理，沒(méi)有進(jìn)行有效蛋白沉降，導(dǎo)致篩板堵塞。這類(lèi)原因造成的流速問(wèn)題可以通過(guò)改善前處理手段來(lái)解決。所以說(shuō)樣品制備充分是保障SPE正常流速的第一步。
二、小柱本身因素（填料粒徑和柱管體積）
1、填料粒徑的影響
填料粒徑大填裝越松散，對(duì)流動(dòng)相阻力小，流速越快；粒徑越小，填裝越緊致，流速越慢。這種現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱上表現(xiàn)得很明顯。一般小柱填料粒徑的范圍是40-60um，農(nóng)殘級(jí)的弗羅里硅土粒徑范圍在75-150um，大孔硅藻土小柱600-900um。所以弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會(huì)比一般小柱流速快，尤其是大孔硅藻土小柱，使用時(shí)需要加上包裝中配套的導(dǎo)流針來(lái)控制流速。
2、柱管體積的影響
對(duì)于同種填料的產(chǎn)品，當(dāng)填料量一定時(shí)，使用的柱管體積越小流速越慢。這是因?yàn)橹荏w積越小，橫截面小，填裝高度越高，所以流動(dòng)相阻力會(huì)增大，導(dǎo)致流速變慢。所以在實(shí)際檢測(cè)工作中，如果對(duì)上樣量和上樣流速有要求，在不影響固相萃取效果的前提下，可以選擇大體積柱管或者高通量的膜片裝置，CNW的DISK圓盤(pán)上樣速度可以達(dá)到50ml/min,在處理大規(guī)模水樣時(shí)有明顯的流速優(yōu)勢(shì)。
三、溶劑的選擇和使用
溶劑的選擇是很多老師在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易忽視的點(diǎn)，比如：C18小柱，一般用甲醇活化，如果用水活化，由于C18的疏水性，水的浸潤(rùn)速度會(huì)慢于甲醇，導(dǎo)致流速變慢。遇到這種情況，調(diào)整活化溶劑就可以解決問(wèn)題了。
溶劑使用順序也會(huì)影響流速，比如活化溶劑為二氯甲烷，平衡溶劑為水，由于二氯甲烷和水不互溶，所以活化平衡時(shí)流速就會(huì)很慢。這種情況我們建議在兩種不互溶的溶劑之間加入過(guò)渡溶劑甲醇，這樣就可以解決問(wèn)題了。
四、空氣層影響
空氣層會(huì)阻礙液體的流路從而造成流速問(wèn)題。篩板或者填料松動(dòng)是形成空氣層的主要原因。商品化的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)運(yùn)輸?shù)竭_(dá)用戶(hù)手中，在運(yùn)輸過(guò)程中，填料和篩板間若發(fā)生了位移松動(dòng)，就容易形成空氣層。這種空氣層有時(shí)比較明顯，可以看到填料有斷層或者細(xì)縫。有時(shí)這種松動(dòng)不明顯，只能在小柱使用過(guò)程中感受到流速上的差異。這種情況下，輕微的松動(dòng)問(wèn)題可以通過(guò)壓實(shí)篩板或者施加正負(fù)壓趕走空氣就可以解決了。
除了運(yùn)輸過(guò)程可能造成篩板松動(dòng)，在小柱的SPE洗脫程序中，如果在活化平衡階段不小心讓溶劑走干了，也會(huì)使填料中進(jìn)入空氣導(dǎo)致影響流速。這個(gè)時(shí)候通過(guò)加壓或者抽真空排走空氣就可以解決問(wèn)題了。
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