液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。 液相色譜儀柱效項與色譜過程動力學特性有關，后兩項與色譜過程熱力學因素有關。
從基本分離方常可看出，提高分離度有三種途徑：①增加塔板數。方法之一是增加柱長，但這樣會延長保留時間、增加柱壓。液相色譜儀更好的方法是降低塔板高度，提高柱效。②增加選擇性。當α＝1時，R=0，無論柱效有多高，組分也不可能分離。一般可以采取以下措施來改變選擇性：a.改變流動相的組成及PH值；b.改變柱溫；c.改變固定相。③改變容量因子。這常常是提高分離度的zui容易方法，可以通過調節流動相的組成來實現。k2趨于0時，R也趨于0；k2增大，R也增大。但k2 不能太大，否則不但分離時間延長，而且峰形變寬，會影響分離度和檢測靈敏度。一般k2 在1～10范圍內，為2～5，窄徑柱可更小些。
液相色譜儀分配系數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關，也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數，離子交換色譜法為選擇性系數（或稱交換系數），液相色譜儀凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來表示。
在條件（流動相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時（Cs 、Cm很小）時，K只取決于組分的性質，而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減少，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質濃度的增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能較少進樣量，使組份在柱內濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。
液相色譜儀在同一色譜條件下，樣品中K值大的組份在固定相中滯留時間長，后流出色譜柱；K值小的組份則滯留時間短，先流出色譜柱。混合物中各組份的分配系數相差越大，越容易分離，因此，混合物中各組份的分配系數不同是色譜分離的前提。在HPLC中，固定相確定后，K主要受流動相的性質影響。液相色譜儀實踐中主要靠調整流動相的組成配比及PH值，以獲得組分間的分配系數差異及適宜的保留時間，達到分離的目的。
17
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務