在細胞培養過程中，經常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養條件中，若加入HEPES，可防止培養基內pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。

HEPES分子量為238.31，化學名：4-羥乙基哌口秦乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。

HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。

關于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻資料有不同的說法。根據用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結如下：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。

二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值，zui后定容。

三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調節至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有兩種：

(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養液中，再過濾除菌。每1000ml培養液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養液加入 lml貯存液，zui終應用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據實際情況正確靈活配制就OK了。