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實驗室“透析”應用介紹

來源:上海優高玖貿易有限公司   2016年08月26日 12:40  

Spectrumlabs提供一系列用于緩沖液置換和小分子雜質去除的透析產品,特別是即用型透析裝置,可為100μL – 10mL樣品透析提供的便利。

透析通過在半透膜兩側,從高濃度一側向低濃度一側的擴散過程,去除小分子。只有小于膜孔徑的分子可以通過膜,在全部料液中達到平衡。一旦達到平衡后,底物不再有“凈”移動,因為分子將以相同的速率,通過膜孔,進入透析單元或出來。相反,不能通過膜孔的大分子,將被截留在其所處的膜的原有一側。

 

為去除不需要的底物,需要更換透析緩沖液,以形成新的濃度梯度。更換緩沖液后,顆粒會繼續從高濃度一側向低濃度一側移動,直到再次達到平衡。每次更換透析緩沖液,膜內部的底物按兩個部分的體積差,被進一步純化。例如,在100mL的透析緩沖液中透析1ml的樣品,平衡時,可透析底物的濃度將被稀釋100倍。每更換100mL新的緩沖液,將使樣品再稀釋100倍。如更換3次100mL的透析緩沖液,且假定每次更換透析緩沖液前,均達到*平衡,樣品種底物的稀釋倍數將為100x100x100,即1,000,000倍。

 

 

影響透析速率的因素有很多,包括:1)透析緩沖液體積;2)緩沖液組成;3)緩沖液更換次數;4)透析時間;5)溫度以及6)顆粒粒徑與膜孔徑的比值。相比僅稍小于膜孔的底物,遠小于膜孔的底物會更快地達到平衡,即需要透過的分子的分子量與膜孔的截留分子量(MWCO)差別越大,透析速率越快。

 

透析膜管具有多種規格,一般,膜的MWCO表示為透析過后,可被膜90%截留的成分的分子量。MWCO的確認需使用多種已知分子量的不同標準蛋白質。但常規來說,MWCO更適于球狀分子,而趨于線性的蛋白質,即使其分子量超過膜標稱的MWCO規格,其也可能通過膜孔。對此,可以選擇MWCO更小的透析設備。對于DNA或RNA樣品,MWCO的選擇應不超過其標稱分子量的1/3,以避免樣品過多的損失。

 

從透析的影響因素可見,特定樣品所需的透析時間很難預測。為*更換緩沖鹽,一般實驗時,多使用樣品體積200-500倍的透析緩沖液,在室溫條件下透析6-8h,并至少更換3次透析緩沖液。zui后一次更換后,再4℃透析一日。這種方法也適合用于去除生物素標記或交聯實驗中過量的標記試劑和反應副產物。

 

 

此外,由于在透析過程中,分子是雙向透過半透膜的,且每種底物達到其自身平衡的過程與其它底物無關,所以,較易發生樣品稀釋。如果某一底物的濃度在膜外側較高,且粒徑足夠小,可以自由通過膜孔,其會有從透析緩沖液進入膜內部樣品的“凈”移動。

 

而水是非常小的分子,可以通過幾乎所有規格透析膜的膜孔。當以較稀釋的緩沖液透析高溶質濃度的樣品時,會有通過膜進入透析膜的水的“凈”移動。當樣品中含有甘油和某些糖時,因其具有較強的吸濕性,擴散通過膜達到平衡后,會顯著影響水的滲透性,導致樣品體積變化。

 

為降低水的移動及其所導致的樣品體積的變化,透析時可使用“步進式”方法,即需要使用低溶質濃度緩沖液透析高溶質濃度的樣品時,可先用稍高濃度的透析緩沖液進行透析,之后每次更換緩沖液時,再逐步降低緩沖液濃度,并zui終達到所需的緩沖液濃度,從而降低在透析過程每個階段,樣品和透析緩沖液的水“濃度”的影響。

 

Spectrumlabs提供兩種材質的透析膜——纖維素酯和再生纖維素,同時提供兩種不同處理規模,標準級和生物技術級,后者更適于對純度較為敏感的生物學實驗,如涉及親和研究和核酸的實驗。此外,仕必純提供預組裝的即用型透析裝置,用于小量樣品的透析處理,這種裝置操作簡便,且可保證較高的樣品收率,可用于HPLC樣品制備、載體藥物的體外溶出等實驗。此外,仕必純可提供0.1-1,000kD的數十種膜MWCO規格,是目前市場上MWCO規格zui全的透析膜產品供應商。

 

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