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| 1. 何時須更換培養(yǎng)基？ 視細胞生長密度和生長狀態(tài)而定，有的細胞消耗培養(yǎng)液較快，細胞有60-70%的匯合度就可以消化傳代，簡單的換液不合適，因為細胞有可能處于缺營養(yǎng)的狀態(tài)；另外一種需要換液情況就是細胞狀態(tài)欠佳的時候，可以用PBS先洗滌一下，再更換*培養(yǎng)液，去除那些死細胞和漂浮的狀態(tài)不好的細胞，可以調(diào)節(jié)一下細胞狀態(tài)。 2. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？ 不建議。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，而且經(jīng)過一定時間馴化，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞都有可能出現(xiàn)不適應(yīng)，表現(xiàn)出生長緩慢，顆粒增多，有死細胞出現(xiàn)，造成細胞無法存活。也有些細胞在更換培養(yǎng)液后也能正常的生長，細胞狀態(tài)也能維持，但是問題往往出現(xiàn)在凍存后期的復(fù)蘇過程，有可能細胞沒法復(fù)蘇，所以不建議隨便更換培養(yǎng)基。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？ 不建議。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。按照道理胎牛血清比小牛血清要好，但是在實際操作中未必如此，更換好的血清細胞同樣會有可能出現(xiàn)生長狀態(tài)欠佳，另外就是，在細胞狀態(tài)欠佳的狀態(tài)，更換好的血清有可能會適得其反，加速細胞死亡，所以不建議隨便更換血清。 4. 何謂FBS, FCS, CS, HS ? FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （horseserum） 則是指馬血清。 5. 細胞之接種密度為何？ 依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長或狀態(tài)欠佳之重要原因。 6. 懸浮性細胞應(yīng)如何繼代處理？ 一般情況下可以加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)瓶中，稀釋細胞濃度即可，但不可以持續(xù)這樣操作，因為細胞的代謝物一直累積在培養(yǎng)液中，隨著時間的延長，濃度越來越高，會影響細胞的生長，所以建議稀釋細胞濃度傳代幾次后要做一次離心處理，去除培養(yǎng)液中長期累積的代謝物，這樣有利于保持細胞的狀態(tài)。 7. 冷凍管應(yīng)如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放入37-40 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。 |
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