在蛋白質生物化學中,表面活性劑廣泛用于樣品溶解,如膜蛋白或包括脂質在內的雜質。此外,在蛋白組學樣品制備中,表面活性劑也變得越來越重要。但不管怎樣,下游分析會由于表面活性劑的存在而被干擾。質譜、層析分離以及光譜讀數可能分別會由于信號抑制、復合物形成以及較高的空白值而被妨礙。
因此,要么選擇可與所用分析方法兼容的表面活性劑,要么在zui終的下游分析前從樣品中去除。雖然前者原理上可能更易成功,但這種方法必需根據每一個樣品和工作流程進行優化。而從實際操作來講,第二種方法相對更簡單。
···············································
有多種方法可以用于表面活性劑的去除,包括直接結合、凝膠過濾、透析、沉淀以及離子交換層析等。哪種方法zui合適,取決于表面活性劑的有效分子量、濃度以及其它特性。
但一般來講,沉淀或層析法對于表面活性劑沒有選擇性,可能導致表面活性劑去除不*,分析物損失以及樣品稀釋。且蛋白質收率較低,成本高,可獲得的蛋白質濃度有限。
而相對來說,透析是zui簡單、通用的處理方法。透析通過體積排阻方式去除表面活性劑,根據表面活性劑和目的蛋白的相對粒徑,表面活性劑可通過被動擴散過程,從蛋白之中分離出來。
表面活性劑特性簡介
由于表面活性劑的物理特性會影響其從樣品中去除的難以程度,所以必需對其有詳細的了解,才能確定zui合適的去除方法。
微膠粒是指溶液中多個表面活性劑單體自發形成的結合體,表面活性劑的臨界微膠濃度(CMC)是指微膠粒形成時的zui低濃度,當高于CMC時,表面活性劑以大分子量結合體的形式存在。
·····················································
CMC同時也是表面活性劑結合到蛋白質的強度的指標,該值較低時,結合較強,該值較高時,結合較弱。此外,CMC還是表面活性劑親水性的指標。
對于大多數可透析去除的表面活性劑,其濃度需低于CMC,因為只有表面活性劑單體可通過這種方法去除。而某些表面活性劑,如CHAPS和辛基-β-葡萄糖苷,由于其所形成的微膠粒的分子量也不高(<10,000D),所以即使超過CMC,也可以用透析去除。
?·······································
特定表面活性劑的去除方法
Triton X-100(單體分子量647,微膠粒分子量90,000,CMC 0.24mM)、Triton X-114(單體分子量537,CMC0.21mM)和NP-4(單體分子量617,微膠粒分子量90,000,CMC 0.29)用于在非變性條件下溶解膜蛋白。由于這類表面活性劑CMC較低,很難直接透析去除,但有報導在含有CHAPS或其它微膠粒徑較小的表面活性劑的溶液中進行透析的方法。隨著CHAPS擴散進入樣品,其會與Triton X-114形成混合微膠粒,從而較低原始微膠粒徑,促進透析。
?···················································
總結
一般來講,相比其它分離原理,透析可使高分子量分析物的收率zui大化。由于只需要液體操作,這種原理可允許平行化和高通量操作。仕必純提供兩種膜材質 - 混合纖維素酯和再生纖維素、兩種膜級別 - 標準級和生物技術級以及超10種以上MWCO規格的透析膜產品,方便用戶根據不同的樣品特性和應用目的,進行“特異性”選擇,方便并簡化實驗設計和樣品處理。
此外,spectrumlabs更提供可在更短時間內完成透析的動態透析裝置。Tube-A-Lyzer動態透析裝置或常規透析膜結合循環透析槽時,通過透析液在膜外部的循環過程,使驅動小分子自由擴散的濃度梯度始終保持在*狀態,從而大大提高透析效率,可將透析時間從“天”縮短至“小時”。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。