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液相色譜柱按色譜固定相基質的分類

來源:依利特(大連)分析儀器有限公司   2016年10月24日 16:05  
     液相色譜柱的空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。柱接頭采用低死體積結構,柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸內螺紋,另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸內螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓環用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
    液相色譜柱在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失??罩鹘M件均為316L不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
    液相色譜柱按色譜固定相基質的分類:
    一.硅膠基質:
    1.反相色譜柱:
    反相色譜填料常是以硅膠為基礎,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。
    反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。
    樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合zui先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
    常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
    2.正相色譜:
    正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。
    由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小,即極性強弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。
    正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene  Chloride)等。
    3.離子交換色譜柱:以磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱,常用規格:強陰離子色譜柱(SAX),強陽離子交換色譜柱(SCX)
    二 .聚合物基質:
    聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優點是在PH值為1~14均可使用。相對與硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
    三.其他無機填料:
    其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用于分離某些幾何導構體,又由于HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC,
    氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在PH高達12的流動相中使用。
    但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用,新型氧化鋯填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH范圍1~14,溫度可達100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行中。

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