ELISA試劑盒檢查體系可謂是免疫學(xué)反響應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段。自個也為此煩惱過很長一段時間，跟著自個技術(shù)水平得前進(jìn)，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是游刃有余吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是駕輕就熟了，曾經(jīng)檢查一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日根本搞定。但是在新老手操作過程中老是會泛起或大或小的標(biāo)題，本人在剛開始做ELISA時就面臨良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是常常做得烏煙瘴氣，比如說花板，假陽性，全顯色，悉數(shù)顯色，顯色比空缺還低。
  ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很主要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不能夠被其辨認(rèn)，所以保留抗原很主要，我做重組蛋白時，師兄都嚴(yán)厲正告我必定要在冰浴下緩慢消融即是這個道理。封閉即是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地閑暇，然后排擠ELISA后的過程中攪擾物質(zhì)的再吸附。但有時由于實驗的需求，包被原的特殊性也也許選用中性的緩沖溶液來包。
  常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，能夠高濃度運用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（首要為了掃除類似蛋白攪擾）和酪蛋白等等。具體的實驗還要有鞏固的理論外也要實習(xí)，看一下*可不能夠應(yīng)用到自個實驗當(dāng)中去。但*選用啥，要依據(jù)實驗具體來實習(xí)。應(yīng)留心以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常富含更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。還有有的包被原也許不是蛋白，關(guān)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事前對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法平均、牢固，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
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