1.ELISA試劑盒包被抗原的挑選
包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類.天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,關(guān)于含雜質(zhì)較多的抗原能夠選用直接捕獲法包被(先用能夠與意圖抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上,再經(jīng)過特異性反應(yīng)使抗原固相化).ELISA試劑盒經(jīng)純化的重組蛋白通常皆可直接包板.小分子抗原比方多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,因?yàn)榉肿恿刻?往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,通常都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上.
2.包被液的挑選
ELISA試劑盒通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也能夠運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.
3.包被溫度的挑選
通常是4-8度條件下或許37度保溫2小時(shí),我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持.
4.包被濃度的挑選
包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,通常蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清晰對(duì)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過試驗(yàn)來斷定.
包板后需求關(guān)閉嗎？應(yīng)當(dāng)挑選什么樣的關(guān)閉系統(tǒng)？
關(guān)閉是不是必要,取決于ELISA試劑盒的形式及詳細(xì)的試驗(yàn)條件.通常說來,雙抗體夾心法,只需酶標(biāo)記物是高活性的,操作時(shí)洗刷*,不經(jīng)關(guān)閉也可得到滿足的結(jié)果.而在直接法測(cè)定中,關(guān)閉通常是*的.常用的關(guān)閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉,AbMART引薦運(yùn)用5%脫脂奶粉,價(jià)廉并且關(guān)閉能力強(qiáng),不過5%脫脂奶粉只合適短期內(nèi)運(yùn)用,不宜長時(shí)間保存,所以試劑盒中較少運(yùn)用.