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液相色譜法測定氯霉素CAP殘留

來源:上海源葉生物科技有限公司   2010年11月13日 09:20  

(1)試劑和材料 除另有規定外所有試劑均為分析純,水為蒸餾水或相當的去離子水。
①乙酸乙酯:分析純
②甲醇:紫外光譜級
⑧正己烷:分析純
④高氯酸:分析純,o.5mol幾
⑤氯霉素標準品:含量≥99%
⑥氯霉素標準溶液:準確稱取適量的氯霉素標準晶,用甲醇配成o.10mg/m1的標準貯備液,根據需要吸取適量貯備液,將甲醇吹去后用o.5mol/L高氯酸溶液配制成癥當濃度的標準工作液。
(2)儀器和設備
①液相色譜儀:配有紫外線檢測器
②均質器:10000r/mln
③離心機:3000r/Hill).
④微量注射器:25,~L、i00~L
(3)測定步驟
①提取與凈化 稱取5。0s均勻試樣(至o.1g)于50ral離心管中,加入lOml乙酸乙酯,稱量后在均質器中快速均質lmin,離心3min。再稱量,補人損失的乙酸乙酯。移取5.Oral乙酸乙酯提取液,置于帶塞尖底離心管中,在45~C水浴中用氮氣吹去乙酸乙酯。殘留物用o.5ml高氯酸溶液溶解,稱量后,加入lml正己烷,振蕩lmin,靜置分層后用吸管吸棄正己烷層。再重復處理3次。用氮氣吹去殘余的正己烷,稱量,加入高氯酸溶液,以補入損失量。經o.45/zm濾膜過濾后,供測定用。
②測定
a.色譜條件
色譜柱:uBondapakCy
波長:280nm
流動相:甲醇—水混合液(35+65)
流速:lml/mia
色譜柱溫度:40~C
b.色譜測定 根據樣液中氯霉素含量情況,選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中氯霉素響應值均應在儀器檢測線性范圍內。對標準工作溶液和樣液等體積參插進樣測定,在上述色譜條件下,氯霉素保留時間約為7.2rain。
(4)空白試驗 除不加試樣外,按上述測定步驟進行。
(5)計算 用色譜數據處理機或按下列公式計算試樣中氯霉素殘留量:
X=Acs/Asc
X--試樣中氯霉素殘留量,mg/kg;
A--樣液中氯霉素的峰面積;
As--標準工作溶液中氯霉素的峰面積;
Cs--標準工作溶液中氯霉素的濃度,Ps/ml
c--zui終樣液所代表的試樣濃度,8/ml。
注:計算結果需扣除空白值。
(6)檢測限和回收率
本方法的檢測限為o.01mg/kg。
在0.010~1 00mg/kg添加濃度水平上,回收率范圍為87.2%一98.3%。
 

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