本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷
人（Human）腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。用純化的抗體
包被微孔板，制成固相載體，往包被抗腫瘤壞死因子α（TNF-α）
抗體的微孔中依次加入標本或標準品、HRP標記的檢測抗體，經過徹
底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，
并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞
死因子α（TNF-α）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光
度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解
后再使用。
2. 標準品臨使用時再稀釋，稀釋后用剩的標準品應立刻丟棄，不可保存。
3. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品（80pg/mL） 0.5mL 0.5mL 按說明書進行稀釋
樣本稀釋液6mL 3mL 無
標準品稀釋液6mL 3mL
檢測抗體-HRP 6mL 3mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
試劑的準備
1. 標準品：標準品（80pg/mL）在實驗前用標準品稀釋液進行倍比
稀釋，得到6 個濃度點（包括標準品點）：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL。
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板4-5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板4-5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條密封放
回4℃。
2. 除空白孔外，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；待測樣本
孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5
倍）；隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標
記的檢測抗體50μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫
育50min。
3. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5 次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
4. 每孔加入底物A、B 各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15min。
5. 每孔加入終止液50μL，15min 內，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
1. 每個標準品和樣本的OD 值應減去空白孔的OD 值。
2. 繪制標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對
應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各
樣本濃度值，再乘以稀釋倍數，即為樣本濃度。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R 值，大于等于
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于6 號標準品。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5. 檢測范圍：0-80pg/mL
6. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
7. 有效期：6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所
產生的一切后果，由實由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者
承擔。