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用氯化銫離心法純化噬菌體

來源:上海源葉生物科技有限公司   2010年11月29日 08:35  
[器材和試劑]
●  L8—M Beckman超速離心機或與其相當的機型
●  吊桶式SWTi4l轉頭或相當類型
●  氯化銫(Sigma)
●  PBS
●  純化的噬菌體樣本
 
[方法]
1.在每毫升zui后的噬菌體懸液(例如來自實驗方案13.11)中,加入0.45 g氯化銫,充分混勻至溶解。
2.用吊桶式轉頭  (或與其相當的型號)  離心溶液,15℃17h,噬菌體將濃縮在組分1和組分2中(。組分1的濃度較高,但組分2的體積較大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取這些組分。如果是*次使用本實驗方案,那么先收集所有條帶并分別對其檢測將是明智之舉。
3.將收獲的溶液對PBS透析過夜。
4.通過感染大腸桿菌DH5cF,或TGl滴定各個不同組分中噬菌體,并保存滴度zui高的組分。通常,噬菌體會集中在1個區帶內,而較少的數量會分散在其他區帶(如果可見)。加入甘油至10%;按每份樣本1013個噬菌體等量分裝并儲存于-80℃。更進一步的質量控制則可進行蛋白雜交印跡,采用抗標簽抗體或抗pⅢ抗體。
用氯化銫純化噬菌粒。
離心后離心管外觀如圖示。噬菌體主要濃縮于碎片樣區帶(組分1)和其下的乳白色區帶(組分2)。兩條區帶均需收集

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