原理
轉化細胞由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下,整個蛋白質所帶負電荷多,則為酸性蛋白質;帶正電荷多,則為堿性蛋白質。據此,可將標本經三氯醋酸處理提出核酸后,用不同pH值的固綠染液分別染色,細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質顯示出來。
轉化細胞方法
1.以破壞脊髓法處死蟾蜍,將其腹面向上放人蠟盤中,剪開胸腔,打開心包。小心將心臟剪一小口,取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端,推片,按此法制備二張血涂片,室溫晾干。
2. 將涂片作好標記放在70%乙醇中固定5分鐘,室溫晾干。
3.放入5%三氯醋酸中60℃30分鐘,抽提出核酸。
4.清水沖洗多次(3分鐘以上),以沖去痕跡的三氯醋酸。
5.濾紙吸干玻片上水分。
6. 一張片放入0.1%堿性固綠(pH8.0~8.5)中染色10~15分鐘,另一張片放入0.1%酸性固綠(pH2.0~2.5)染色5~10分鐘。
7.清水沖洗,蓋上蓋片鏡檢。
轉化細胞結果經堿性固綠染色片中,胞質、核仁不著色,細胞核大部分被染成綠色,是為堿性蛋白質存在處。經酸性固綠染色片中,因胞質和核仁中有酸性蛋白,被染成綠色。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。