在ELISA試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶物后。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗的機會，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。    

我公司技術員提到：這是一個逐漸平衡的進程，因而需經分散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這即是為何ELISA反響老是需求必定時刻的溫育。    

溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反響通常在37℃經1-2小時，產品的生成可達高峰。    

為加速反響，可進步反響的溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中放置一晚，以構成zui多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中通常不予選用。    

若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。    

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