手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
DNA探針一般可以用32P, 35S或非放射性物質如biotin及digoxigenin （DIG） 加以標定；標定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應中，另加入 [α-32P] dATP,[α-32P] dCTP或DIG-11-dUTP等標定物質，所合成出來的即是被標定的核酸片段。目前常見的方法包括nick translation, random priming與polymerase chain reaction（PCR） 等。 若須對DNA進行end labeling時，可以進行kinase或filling-in reaction。
前者以 [γ-32P] ATP為phosphate donor，利用T4 polynucleotide kinase的活性對帶有5’-OH的DNA進行標定。人工合成的寡核苷酸 （oligonucleotides） 5’端為-OH group，可直接用于kinase reaction；一般DNA片段，若5’端帶有phosphate group，先經phosphatase處理，再進行kinase reaction。 Filling-in reaction是將DNA以特定限制酶切開，露出recessed 3’ termini后，利用Klenow的活性把3’端補齊 （filling-in）；因此，只要加入適當的 [α-32P] dNTP，即可在DNA的3’端進行標定。
此外，也可以應用bacteriophage T4 DNA polymerase 的3’→5’ exonuclease 活性制造recessed 3’termini，再進行filling-in。 至于正意股或反意股RNA探針，則可以 [α-32P] UTP或DIG-11-UTP等為標定物質，應用胞外轉錄反應加以標定。 下面要介紹的是目前zui常用的方法：random priming及PCR。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心