ELISA免疫符號技能試驗原理

ELISA免疫符號技能試驗原理
免疫符號技能是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質符號到特異性抗原或抗體分子上，經過這些符號物的增強擴大效應來顯現反響體系中抗原或抗體的性質與含量。常用的符號物包含熒光素、酶和放射性核素等，用這3種符號物進行符號的免疫檢測技能被稱為3大免疫符號技能。現在，使用的免疫符號物還有化學發光物質、鐵蛋白和膠體金等。

辣根過氧化物酶(HorserADIsh Peroxidase, HRP)
辣根過氧化物酶 (horse radish peroxidase，簡稱HRP，EC.1.11.1.7)是植物中研討得zui深入的一種過氧化物酶，早在20世紀30年代就有人著手從辣根中別離此酶，以后又制備出結晶。本試驗是以辣根為質料，經過水的抽提，硫酸銨和丙酮分級別離，再經鋅離子純化，透析除鹽，冰凍枯燥，便可得到高純度的辣根過氧化物酶。

辣根過氧化物酶是一種含亞鐵血紅素的蛋白質，HRP廣泛散布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同功酶構成，Mr在40000左右，等電點7.2。溶于水，溶解度為5%(W/V)，溶液呈棕赤色，通明。酶催化的zui適PH因供氫體不一樣而稍有區別，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP可溶于0.58飽和度以下的硫酸銨溶液，而0.62飽和度以上則不溶。該酶zui適pH7.0(對愈創木酚為氫給體而言)。

在室溫下，HRP幾周內安穩，加熱到63℃，在15min內安穩。氧化還原電勢很低，pH6.08時，E 0 =-0.2070V，pH為7.71時，E′0 =-0.2787V。HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm，通常以OD403nm/OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表明酶的純度。* ?# p. n2 ~1 w. X3 b

酶符號物包含酶符號抗原、酶符號抗體和酶符號SPA等。酶符號物質量的好壞直接關系到免疫酶技能的成功與否，因而被稱為要害的試劑。酶符號物中zui常用的是酶符號抗體，它是將酶與特異性抗體經恰當辦法銜接而成。酶符號抗體的質量首要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有杰出的制備辦法。現在，高質量的酶(如辣根過氧化物酶，簡稱HRP)國內已有產品供應。高質量的抗體則可經過獲取純化而取得。在制備辦法上，宜選用產率高、不影響物的活性和不稠濁攪擾性物質且操作簡便易行的辦法。