RNA純化要求---RNA樣品中不應(yīng)存在對酶(如逆轉(zhuǎn)錄酶)有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子,避 免其他生物大分子如蛋白質(zhì),多糖和脂類分子的污染,排除DNA分子的污染。
一、RNA純化方法及沉淀---有機溶劑抽提法
1、抽提
在使用RNA提取試劑進行RNA提取時,常使用進行抽提,以去除蔗糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì),并促進水相與有機相的分離,從而達到純化RNA的目的。抽提RNA后,一般采用異丙醇或乙醇來沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇,室溫沉淀20-30min,高速離心,可獲得RNA沉淀。
2、洗滌沉淀
加入無RNase的75%乙醇,將RNA沉淀震蕩懸浮,使RNA沉淀中的鹽離子被充分溶解。然后在離心10-30min,再次沉淀RNA。離心后,小心倒掉上清(注意不要倒出RNA沉淀),隨后短暫離心,將殘留在管壁上的乙醇收集到管底后,用小槍頭吸凈,超凈臺中風(fēng)干1-2min(注意不要太干,否則RNA沉淀不易溶解)。
3、溶解沉淀
加入適量RNase-Free Water溶解RNA沉淀。
二、RNA純化方法及沉淀---硅基質(zhì)吸附法
隨著實驗方法的改進,現(xiàn)已發(fā)展出一種采用吸附材料純化核酸的方法。目前較常見的有:硅基質(zhì)吸附材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。硅基質(zhì)吸附材料因其具有可特異吸附核酸,使用方便、快捷,不使用有毒溶劑如苯酚、等優(yōu)點,成為核酸純化的。
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