ELISA試劑盒測定過程：固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加停止液→比色→斷定成果。

ELISA試劑盒操作較冗雜,在操作中應留意以下5個方面。
1. 跟著病況的發展或由別的因素影響，某些抗體在機體內的含量發作大幅動搖，因此有必要對標本進行預處理。直接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。
2. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決議試驗勝敗的一個關鍵過程。意圖是除掉未的免疫反響物，停止抗原抗體反響，除掉標本中與反響無關的成分、游離的酶標物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質。可用洗板機洗板或手藝洗板，前者洗刷質量較好，各反響孔洗刷作用均一，批內、批間區別小，手藝洗板應留意操控各孔洗刷作用，區別不宜太大。
3. 準確斷定成果須運用ELISA試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，依據反響液色彩的不一樣選用不一樣波長的濾光片，以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標儀具有良好的重復性。
4. 加樣通常運用加液器，在ELISA試劑盒中通常有4次加樣：加標本、加酶物、加底物和加停止液。加標本時必須每份標本運用一支移液器吸嘴，避免穿插污染。加酶物、底物和停止液時則不需更換吸嘴。
5. 在成批手藝檢查中，還應留意操作時差的影響。加樣及混勻時間的區別，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢查影響很大，不留意可能會致使過錯成果或定量禁絕。