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不同類型的檢測樣本前期的處理辦法

來源:研域生物技術(shù)(上海)有限公司   2017年11月16日 09:27  

用于elisa檢測的樣本有很多種類型,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培育上清或安排勻漿液等,下面介紹下不同類型的檢測樣本前期的處理辦法。
1、血清
血清是zui常用于elisa檢測的一類樣本,處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細(xì)心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。一起必須得留意,在采血的過程中應(yīng)防止溶血,以及防止細(xì)菌污染,防止形成試驗成果的不。

 

2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本,標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。防止運(yùn)用溶血或高血脂的標(biāo)本。

 

3、細(xì)胞培育上清
取細(xì)胞培育上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

 

4、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。為了保證檢測的性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。

 

5、細(xì)胞裂解液
1.吸去培育板內(nèi)的培育基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培育基將細(xì)胞從培育板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省掉。
2.搜集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預(yù)冷的pbs潤洗3次。
3.參加適量的預(yù)冷pbs或細(xì)胞裂解液(臨用前參加蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個孔的細(xì)胞量需求150~250μl pbs重懸。
4.將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫凍結(jié)樣品,重復(fù)凍融幾回,使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以到達(dá)裂解的意圖。
5.4℃ 10000×g 離心10min,除掉細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

 

6、安排勻漿液
1.將安排樣本用pbs (0.01m, ph 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。
2.將安排塊稱重,記載后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充沛
3.將安排按必定的份額參加預(yù)冷的pbs(臨用前參加蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿份額為安排分量:pbs體積=1:9,勻漿時置于冰上或冰浴中。
4.汲取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復(fù)凍融。

 

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