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間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結(jié)果，但應(yīng)盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì)，例如以 E.Coli 為工程酶的重組抗原，如其中含有 E.Coli 成份，很可能與受過 E.Coli 感染者血甭中的抗 E.Coli 抗體發(fā)生反應(yīng)。抗原中也不能含有與酶標(biāo)抗人 Ig 反應(yīng)的物質(zhì)，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的 Ig去除，試驗中也發(fā)生假陽性反應(yīng)。另外如抗原中含有無關(guān)蛋白，也會因竟?fàn)幬蕉绊懓恍Ч?/span>
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性 IgG 只占總 IgG 中的一小部分。IgG 的吸附性很強(qiáng)，非特異 IgG 可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被后一般用無關(guān)蛋白質(zhì)（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空余間隙。另外，在技術(shù)過程中標(biāo)本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結(jié)果的判斷。
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