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實驗室新手指南之DNA&RNA提取

來源:上海希言科學儀器有限公司   2017年12月22日 11:33  

 DNA 提取

  1. 取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入 1.5 ml Eppendorf 管中;
  2. 加入 800 μl 的 CTAB 提取緩沖液,混勻(CTAB 在 65℃水浴預熱),每5min輕輕震蕩幾次,20min后12000 r/min,離心15 min;
  3. 小心吸取上清液,加入等體積的酚:氯fang(各 400μl)溶液,混勻,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
  4. 小心吸取上清液,加入等體積的氯fang,混勻,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
  5. 重復步驟(4)1-2 次,以蛋白層不出現為止;
  6. 取上清,-20℃沉淀 1h,4℃,12000 r/min,離心 10 min;
  7. 棄去上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀 2 次;
  8. 室溫下干燥后(一般干燥 5-15 min),溶于 30-50 μl DEPC 去離子水中,于-20℃或者-70℃下保存備用。

RNA 提取

樣品處理:

  1. 培養細胞:收獲細胞 1-5×107,移入 1.5ml 離心管中,加入 1ml Trizol,混勻,室溫靜置 5min。
  2. 組織:取 50-100mg 組織(新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可)置 1.5ml 離心管中,加入 1ml Trizol 充分勻漿,室溫靜置5min。

提取步驟:

  1. 加入 0.2ml 氯fang,振蕩 15s,靜置 2min。
  2. 4℃離心,12000g×15min,取上清。
  3. 加入 0.5ml 異丙醇,將管中液體輕輕混勻,室溫靜置 10min。
  4. 4℃離心,12000g×10min,棄上清。
  5. 加入 1ml 75%乙醇,輕輕洗滌沉淀。4℃,7500g×5min,棄上清。
  6. 晾干,加入適量的 DEPC H2O 溶解(65℃促溶 10-15min)。

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