1. 色譜柱的平衡

　　反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得zui大的"補償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟：

　　a. 平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡)

　　b. 如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡； 分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。

　　2. 色譜柱的再生

　　長期使用的色譜柱，往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。

　　建議用來沖洗柱子的溶劑體積

　　色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積

　　125-4mm 1.6ml 30ml

　　250-4 mm 3.2ml 60ml

　　250-10mm 20ml 400ml

　　選擇再生方法：

　　極性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料)的再生：

　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

　　非極性固定相(如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等)的再生：水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水

　　注意：

　　a. 在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液*流出。

　　b. 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

　　3. 色譜柱的維護

　　a.使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)

　　b.大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

　　c.避免流動相組成及極性的劇烈變化

　　d.流動相使用前必須經脫氣和過濾處理

　　e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中

　　f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。