測定原理：現在elisa試劑盒除非是測定抗體的以外，一般運用的是雙抗體夾心法，此種辦法大多數用的是增強的雙抗體夾心法，即運用生物素-親和素體系，還有少量的目標可能運用競爭法，這類辦法適用于半抗原的測定。

具有雜亂結構的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗，否則布景很高。當然假如兩個都是單抗(這兩個單抗針對不同表位)，那么測定的線性規模就較寬，試劑盒功能就較好；一個用單抗，一個用多抗，測定的靈敏度會較高。

某些簡略的化合物用ELISA試劑盒測守時，由于沒有兩個或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競爭法測定。假如你發現有測定簡略化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要置疑了。別的還要闡明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的差異。
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一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，跟著待則標本中抗原濃度的添加而升高至必定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的添加而開端下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀應”(hookeHect)，也就是咱們在免疫沉淀實驗中所稱的“帶現象”(zonephenomenon)。所以當運用一步雙抗體夾心法時，樣品濃度太高，有時會呈現測不出來的現象，此刻要作恰當的稀釋才干準確測定。

試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的辦法時，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，翻開后有干燥劑，實驗時暫未運用的酶標條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。