親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子密切結合。現在運用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子構成生物素化的產品。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為安穩。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結合方位，可以聯接更多的生物素化的分子，構成一種類似晶格的復合體。因而把親和素和生物素與ELIS偶聯起來，就可大前進ELISA的敏感度。

親和素－生物素系統在ELISA中的運用有多種形式，可用于直接包被，亦可用于終反應擴展。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不只可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分露出。其他，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然后聯接親和素－酶結合物，以擴展反應信號。

ELISA廣泛用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 一般標準配體是固定的, 通過參與溶液相受體或蛋白質來使之成鍵. 通過參與與受體特異性反應的抗體來定量成鍵的受體, 而且開端抗體的量以參與第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能辨認抗體的結束, 在其結束的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發生反應, 從而使溶液顯色.