小鼠ELISA試劑盒用于測定血清、血漿、組織和相關液體樣本中的含量或許活性。試劑盒選用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。往預先包被小鼠總補體(CH50)捕獲抗原的包被微孔中,依次參加標本、標準品、HRP符號的檢測抗體,通過溫育并*洗刷。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終究的。顏色的深淺和樣品中的小鼠總補體(CH50)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),核算樣品濃度。為了確保實驗的成功,有必要了解一下小鼠ELISA試劑盒實驗時須留心的事項。
一、實驗反應時間留心事項
1、在備孔稀釋好待測樣品和標準品;
2、上板:應從終究一孔上完板初步計時,以確保反應時間;
3、加底物:應從加*孔初步計時,以確保加停止液時的反應時間是5分鐘。
二、移液器的運用留心事項
1、設定移液體積:從小量程調理至大量程時,應先調至逾越設定體積刻度,再回調至設定體積,這樣能夠確保移液器的度;
2、裝配槍頭:將移液槍垂直刺進吸頭,左右旋轉半圈,上緊即可;
3、吸液和放液:吸頭浸入液面3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預潤洗2-3次確保移液的精度和準度,慢吸慢放,以防俄然松開溶液吸入過快而沖入取液器內腐蝕柱塞而構成漏氣;
4、吸有液體的移液槍不應平放;
5、移液槍在每次實驗后應將刻度調至zui大量程,讓彈簧回復原型以延伸移液槍的運用壽命。
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