ELISA試劑盒顯色這一步驟可能碰到的問題有:
A、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑。
B、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
相應解決辦法:
1、加樣時保持顯色劑不外流。
2、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
3、A、B液應避免接觸金屬器械。
注:顯色是elisa實驗的zui后一步溫育反應,所以顯色也是重要步驟之一。
采購ELISA試劑盒時各決定因素如下:
A、抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,實際上有時候二者結合效果更好。
B、交叉反應:在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應。
C、檢測方式:一般ELISA試劑盒檢測的是酶促反應的可溶性產物,抗體上結合有相應的酶,而反應體系中添加有相應的底物,酶可以結合在一抗上,也可以結合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。
D、實驗類型:ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個共同特點,就是進行抗原捕獲,一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。
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