轉化細胞凍存是細胞培養、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩定的細胞系或穩定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
1、常用凍存液組成成分
20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細胞內冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存備用。
2、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細胞膜,降低細胞外未結冰溶液中溶質濃度,使細胞免受高濃度溶質的損傷,細胞內水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結合,可使冰點下降,減少細胞內冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。
3、轉化細胞注意事項
1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。
2.DMSO要用新的,而且要避光保存。
3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
Pyridostigmine Bromide 200mg 溴吡斯的明標準品 101-26-8
200mg B-D-半乳糖苷酶標準品 9031/11/2
L-Cysteine Hydrochloride 200mg L-半胱氨酸鹽酸鹽標準品 7048/4/6
Pentoxifylline 200mg 己酮可可堿標準品 6493/5/6
Proparacaine Hydrochloride 200mg 鹽酸丙美卡因標準品 5875/6/9
Beclomethasone Dipropionate 200mg 丙酸倍氯米松標準品 5534/9/8
Mexiletine Hydrochloride 200mg 鹽酸美西律標準品 5370/1/4
Diltiazem Hydrochloride 200mg 鹽酸地爾硫卓標準品 1205003
Fluorometholone Acetate 200mg 氟米龍醋酸酯標準品 3801/6/7
轉化細胞
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