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流式細胞術數據處理與分析

來源:上海希言科學儀器有限公司   2018年05月29日 11:41  

數據的顯示通常可分為一維單參數直方圖(histogramplot)、二維點圖(dotplot)、二維等高圖(contour)和假三維圖(pseudo3D)等。下面簡述zui常用的單參數直方圖和二維點圖。

 

1.  單參數直方圖單參數直方圖是一維數據用得zui多的圖形,可用來進行定性分析和定量分析。橫坐標表示熒光信號或散射光信號強度的相對值,其單位用“道數”(channel)表示,橫坐標可以是線性的,也可以是對數的。縱坐標通常代表細胞出現的頻率或相對細胞數。下面以研究細胞周期為例說明如何分析單參數直方圖所表達的信息。
 

單參數直方圖
 

經DNA特異性染料(如P1)染色的細胞群體,通過流式細胞儀測量區受激光照射后發出特異性熒光,在一定條件下,熒光強度與細胞內的DNA含量成正比,DNA含量高的細胞發射的熒光強,反之則弱。

DNA含量與細胞數目的關系,即2N(2倍體)代表GO/G1期細胞,4N(4倍體)代表G2/M期細胞,兩者中間代表S期細胞。這是典型的以2倍體和4倍體細胞為主的流式DNA圖。通過上述信息可得到所測細胞群

中增殖細胞的數量。

 

2.  二維點圖單參數直方圖只能表明一個參數與細胞數量間的關系,不能顯示兩個獨立參數與細胞數量的關系。當需要研究兩個或更多測量參數之間的關系時,可采用二維點圖。

二維點圖有兩種形式,橫坐標表示前向散射光(FSC),反映細胞的大小;縱坐標表示側向散射光,反映細胞內顆粒的大小和多少。坐標圖上每一點同時表示具有相應坐標值的細抱存在。

例如,人血白細胞懸液樣品上機后,在坐標圖上根據細胞大小和細胞內顆粒形態出現三類不同顏色的細胞群,通過設門框把這三類細胞區分開,即紅色顯示(P1)淋巴細胞群,綠色顯示(P2)單核細胞群,藍色顯示(P3)中性粒細胞群。如果欲檢測其中一種細胞兩個獨立參數與細胞數量之間的關系,則選定其中一個門框。

假設選定淋巴細胞(P1),即可對其兩種不同熒光素標記的細胞數量進行分析,出現第二種形式的二維點圖。橫坐標為PerCP-Cy5熒光標記的CD3細胞數目(熒光道數),縱坐標為FITC熒光標記的CD4細胞數目(熒光道數)。

因此,左上象限(Q1)代表CD4―細胞百分比,右上象限(Q2)代表CD4+/CD3-細胞百分比,左下象限(Q3)代表CD4―/CD3―細胞百分比,右下象限(Q4)代表CD3―細胞百分比。由此得知,在CD3+淋巴細胞中CD4―淋巴細胞所占的百分比。
 

 雙指標二維點囤的細胞群框定            熒光雙染色二維點圖

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