膠體金標記試劑的檢測
膠體金粒子在pH值接近蛋白質的pI時，二者容易形成牢固的結合物。膠體金粒子可以廣泛地與抗免疫球蛋白抗體、蛋白A、鏈霉親合素等結合。由于結合的蛋白可與金粒子緩慢地分離，因此，膠體金試劑在使用前應該通過洗滌去除游離蛋白。
金標記zui初用于電子顯微鏡研究，但亦可用于光學顯微鏡，得到比酶標記方法較高的分辨率，而且，可避免底物的準備及內源性酶活性干擾等問題。金標記在光學顯微鏡水平雖缺乏敏感性，但應用光化銀增強顯影方法克服了這一問題。
非擴大的金標記可直接用于光學顯微鏡檢測，在明視野下，依據反應強度的不同，標記范圍從淡粉色到深紅色，Nomarski不同的干擾與光學顯微鏡形成對照，使標記物呈現深紅色到黑色。使用銀增強方法，金粒子由金屬銀包被形成一種黑褐色標記物，通過明視野極易觀測。膠體金標記方法可與許多組織化學染色方法相配合。金標記反應亦很容易控制，因為染色的呈現過程可在光學顯微鏡下直接監測，并可有控制地繼續進行。
1．需要的溶液和特殊設備
0．5mol／L的枸櫞酸鈉（pH3．5） 5．6％羥苯醌（避光保存）；
0．73％乳酸銀（避光保存）；
1％乙酸
標準的固定液。
檢測用的暗室，光學顯微鏡（通常帶有照相機以便于記錄結果）。
2．操作步驟
（1）在蒸餾水中短暫地漂洗標本片，標本片可以在染色后直接檢測或者用銀增強處理后觀察，用Gelvattol或者Mowiol封片；
（2）銀增強方法，轉移樣本到暗室中。檢測劑的準備：混合2份0．5mol／L枸櫞酸鈉（pH3．5），3份5．6％羥苯醌和12份水。使用前再直接加3份0．73％乳酸銀；
（3）將金標記物處理的標本片浸泡于此檢測液中，室溫孵育2～3min；
（4）用1％乙酸短暫地漂洗，并在標準攝影固定液中固定數分鐘；
（5）優化：如果需要，進行復染；
（6）樣品用DPX封片。
手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
采購中心