筆者認為此環節是微生物菌種培養的中心環節，也是重要的環節。培養菌種嚴格按照操作規程，注意每個細節。
1、空氣過濾器和接入培養罐的硅膠管要一起提前滅菌，建議在空氣過濾器和接入培養罐的硅膠管間安裝一個逆止閥，防止培養液倒流，這是很關鍵的，否則培養時因為內外壓力差變化，培養液容易回流。
2、監測菌種純度。這一步是至關重要的環節，此步驟將直接決定你的成敗，監測不好可能會導致全軍覆沒。監測菌種純度有以下幾種方法：
①看：看培養液是否透明澄清，菌球是否均勻。培養液不能渾濁。用試管或錐形瓶，從下面接出少量液體（注意，一定要在大火焰的保護下進行），觀察菌球是否懸浮，不能在短時間內下沉或上浮。
②聞：聞放氣閥處是否有菌絲的純香，不能是其他酒精味、酸味甚至惡臭，要回辨別霉菌和細菌感染時不同的氣味。
③顯微鏡觀察：顯微鏡觀察一些霉菌的特征，平時可以將已經確定的液體菌拿來觀察練習，借助一些教材，對比觀察，這是經驗累積才能確定的，但也是*的。顯微鏡具體使用方法本論壇有介紹。
④培養監測：這一步是簡單也是直觀的，直接反應了該菌種是否純凈。具體操作如下：提前做好試管或錐形瓶瓊脂培養基，并提前做好滅菌工作，再用此小錐形瓶或試管，在培養罐的下面放料處，接少量的培養液（這一步兩人操作，一個人負責火焰保護，一個人負責接液體），整個過程在火焰的保護下塞上棉塞。傾斜放置，讓部分瓊脂露出培養液。控制溫度，1～2天即可觀察，霉菌和細菌都可以盡收眼底，如果有感染，培養罐全體培養液應及時放棄，否則后果很嚴重。
    接種環節
    首先確保微生物菌種純凈且旺盛的前提下，再討論接種環節。接種也是液體菌種較為關鍵的環節，因為菌種含水量大，操作中很容易感染空氣中的雜菌。我把我的接種方法透露一下，希望對您有幫助。接種操作：五人一組，每一組一把接種槍，五個酒精燈。一個人專門負責接種槍的把握注射菌種，其余四人負責打開袋口（菌袋用無棉蓋封口，便于操作）。每人面前一個酒精燈，酒精燈火焰一定要大，大到可以包圍無棉蓋口。接種時，在火焰上打開蓋口，在火焰上接種，接完后，在火焰上蓋上蓋口，整個環節要迅速，否則火焰要把菌袋燒壞。接種槍在沒有用的時候將整個槍頭放在火焰上，避免在空氣中放置。整個操作環節保險度*，對接種室的滅菌要求不高。

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